移植前にGVHD関連T細胞を推定するヒト急性GVHDにおけるT細胞応答の解析

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K08321
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 村田 誠 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (40378063)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 造血幹細胞移植 / 移植片対宿主病 / T細胞 / アロ抗原 / T細胞受容体

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、ヒト急性移植片対宿主病（GVHD）組織浸潤T細胞や末梢血中T細胞のT細胞受容体（TCR）塩基配列を次世代シークエンサーにより網羅的に決定し、TCRレパトアの偏りやアロ反応性T細胞クローンの頻度などを推定する。そしてそれらとGVHD臨床経過との相関を解析する。また、患者とドナーの単核球混合培養（MLR）や患者皮膚・ドナー単核球共培養などを利用してアロ反応性T細胞クローンの推定が可能か否かを明らかにする。さらに血漿中可溶性PD-L1濃度、PD-1陽性T細胞割合、制御性T細胞（Treg）割合などを解析し、GVHDの消退にT細胞の疲弊やTregの増減が与える影響も明らかにする。
平成30年度は、12例の移植後患者からGVHD皮膚9検体、GVHD腸4検体の提供を受け、組織浸潤T細胞のTCR塩基配列を網羅的に決定した。それらのシンプソン多様性指数（1/Ds）は、皮膚が中央値14.77、腸が中央値2.68といずれも同時期の末梢血（それぞれ185.9と182.6）と比べて小さく、すなわち末梢血と比べGVHD組織におけるTCRレパトアの偏りが強いことが確認された。血縁者間移植2例でドナーと患者の両者から末梢血の提供を受け、MLRを行い分裂ドナーT細胞（アロ反応性ドナーT細胞）のTCR塩基配列を決定した。うち1例では、GVHD組織で高頻度を示したT細胞クローンがMLRで推定したアロ反応性ドナーT細胞に含まれていた。現在は、GVHD組織検体やMLRの解析例数を蓄積するとともに、患者から提供された移植前皮膚とドナー単核球との共培養を開始している。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

患者からのGVHD組織（皮膚、腸）の検体収集およびレパトア解析は順調に進んでいる。またドナーからの末梢血も順調に得られており、MLRを用いたアロ反応性T細胞の推定も解析症例が蓄積されつつある。今後は、患者からの移植前皮膚の提供が増加すれば本研究はさらに加速すると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

GVHD組織浸潤T細胞の網羅的TCR解析やMLRにおける分裂ドナーT細胞分画の網羅的TCR塩基配列決定については、確実に実験系は機能しており特に問題はない。今後は、移植患者およびドナーに対して本研究の意義等について丁寧に説明し、1例でも多くの検体（特に移植前皮膚生検検体）の提供について理解を得るよう努力する。

Causes of Carryover

理由：購入予定だった試薬が当該年度内に納品できず、その支払いを翌年度に繰り越したため。
使用計画：上述の通り、試薬代（物品費）として使用する。

Research Products

• [Journal Article] Quantitative assessment of T cell clonotypes in human acute graft-versus-host disease tissues. (2019)
  • Author(s): Koyama D, Murata M, Hanajiri R, Akashi T, Okuno S, Kamoshita S, Julamanee J, Takagi E, Miyao K, Sakemura R, Goto T, Terakura S, Nishida T, Kiyoi H.
  • Journal Title: Biol Blood Marrow Transplant Volume: 24 Pages: 417-423
  • DOI: 10.1016/j.bbmt.2018.10.012.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Impacts of thymoglobulin in patients with acute leukemia in remission undergoing allogeneic HSCT from different donors. (2019)
  • Author(s): Wakamatsu M, Terakura S, Ohashi K, Fukuda T, Ozawa Y, Kanamori H, Sawa M, Uchida N, Ota S, Matsushita A, Kanda Y, Nakamae H, Ichinohe T, Kato K, Murata M, Atsuta Y, Teshima T.
  • Journal Title: Blood Adv Volume: 3 Pages: 105-115
  • DOI: 10.1182/bloodadvances.2018025643.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Clinical implications of t(11;14) in patients with multiple myeloma undergoing autologous stem cell transplantation. (2019)
  • Author(s): Takamatsu H, Yamashita T, Kurahashi S, Saitoh T, Kondo T, Maeda T, Nakazawa H, Murata M, Narita T, Kuroda J, Hashimoto H, Kawamura K, Miyamoto T, Honda S, Ichinohe T, Atsuta Y, Sunami K.
  • Journal Title: Biol Blood Marrow Transplant Volume: 25 Pages: 474-479
  • DOI: 10.1016/j.bbmt.2018.11.003.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Impact of graft-versus-host disease on relapse and survival after allogeneic stem cell transplantation for pediatric leukemia. Bone Marrow Transplant. (2019)
  • Author(s): Kato M, Kurata M, Kanda J, Kato K, Tomizawa D, Kudo K, Yoshida N, Watanabe K, Shimada H, Inagaki J, Koh K, Goto H, Kato K, Cho Y, Yuza Y, Ogawa A, Okada K, Inoue M, Hashii Y, Teshima T, Murata M, Atsuta Y.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplant Volume: 54 Pages: 68-75
  • DOI: 10.1038/s41409-018-0221-6.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Introduction of genetically modified CD3ζ improves proliferation and persistence of antigen-specific CTLs. (2018)
  • Author(s): Miyao K, Terakura S, Okuno S, Julamanee J, Watanabe K, Hamana H, Kishi H, Sakemura R, Koyama D, Goto T, Nishida T, Murata M, Kiyoi H.
  • Journal Title: Cancer Immunol Res Volume: 6 Pages: 733-744
  • DOI: 10.1158/2326-6066.CIR-17-0538.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 造血幹細胞移植における間葉系幹細胞の臨床応用. (2019)
  • Author(s): 村田 誠.
  • Organizer: 第18回日本再生医療学会総会
  • Invited
• [Presentation] 間葉系幹細胞と造血幹細胞移植. (2019)
  • Author(s): 村田 誠.
  • Organizer: 第41回日本造血細胞移植学会総会
  • Invited
• [Presentation] 本態性血小板血症および真性赤血球増加症から移行した二次性骨髄線維症に対する同種移植の成績. (2019)
  • Author(s): 村田 誠、鈴木律朗、西田徹也、森 毅彦、福田隆浩、一戸辰夫、熱田由子、清井 仁.
  • Organizer: 第41回日本造血細胞移植学会総会
• [Presentation] The association between a SNP in the SOAT1 gene and the incidence of chronic GVHD after allo-HSCT. (2018)
  • Author(s): Kamoshita S, Murata M, Koyama D, Sakai T, Okazaki S, Okuno S, Julamanee J, Takagi E, Miyao K, Goto T, Ozawa Y, Miyamura K, Terakura S, Nishida T, Kiyoi H.
  • Organizer: 第80回日本血液学会学術集会
• [Presentation] Comparison of outcomes of allogeneic hematopoietic cell transplantation for primary myelofibrosis among stem cell source groups. (2018)
  • Author(s): Murata M, Takenaka K, Uchida N, Ozawa Y, Ohashi K, Kim SW, Ikegame K, Atsuta Y, Hirokawa M, Fukuda T, Kondo T.
  • Organizer: The 60th annual meeting of the American Society of Hematology
  • Int'l Joint Research