Frequency analysis of graft-versus-host reactive T cell clones in human acute graft-versus-host disease tissues

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K08321
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 村田 誠 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (40378063)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 造血幹細胞移植 / 移植片対宿主病 / T細胞 / アロ抗原 / T細胞受容体

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、ヒト急性移植片対宿主病（GVHD）組織に浸潤しているT細胞のT細胞受容体（TCR）塩基配列を次世代シークエンサーにより網羅的に決定し、TCRレパトアの偏りの強さとGVHD重症度・治療反応性などとの相関を明らかにする。また、患者とドナーの末梢血単核球（PBMC）を混合培養（MLR）することで、GVHD組織浸潤T細胞中の高頻度T細胞クローン（GVHD関連T細胞クローン）をin vitro assayにより推定可能かどうかを明らかにする。
平成30年度から令和2年度に、皮膚急性GVHD発症患者29例から計32検体のGVHD皮膚生検組織の提供を受けた。生検組織浸潤T細胞のTCR塩基配列を決定し、シンプソン多様性指数（1/Ds）を用いてTCRレパトアの偏りを評価した。その結果、皮膚GVHDの重症度（stage）が高い症例で1/Dsが低値となる傾向が確認された。また、stage 2と3の皮膚GVHDに限定した場合、ならびにstage 3の皮膚GVHDに限定した場合のいずれにおいても、ステロイド治療難反応性の症例で1/Dsが低値となる傾向が確認された。
また平成30年度から令和2年度に、4組の患者・ドナーペアから末梢血の提供を受けMLRを行った。患者PBMCで刺激し分裂したドナーT細胞のTCRと、ドナーPBMCで刺激し分裂したドナーT細胞（コントロール）のTCRの違いに着目し、4組それぞれにおいて228、221、261、73個のアロ反応性T細胞TCRを決定した。そしてそれらTCRの、移植後に発症した皮膚GVHD組織における頻度を確認したところ、予想に反して高頻度（10%以上と定義）を示すクローンはなかった。

Research Products

• [Journal Article] A multicenter phase II study of intrabone single-unit cord blood transplantation without antithymocyte globulin. (2021)
  • Author(s): Nishida T, Kobayashi T, Sawa M, Masuda S, Shibasaki Y, Goto T, Fukuhara N, Fujii N, Ikegame K, Sugita J, Ikeda T, Kuwatsuka Y, Suzuki R, Najima Y, Doki N, Kato T, Inagaki Y, Utsu Y, Aotsuka N, Masuko M, Terakura S, Onishi Y, Maeda Y, Okada M, Teshima T, Murata M.
  • Journal Title: Annals of Hematology Volume: 100 Pages: 743～752
  • DOI: 10.1007/s00277-020-04365-z
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Outcome of Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Patients with Myelodysplastic/Myeloproliferative Neoplasms-Unclassifiable: A Retrospective Nationwide Study of the Japan Society for Hematopoietic Cell Transplantation. (2020)
  • Author(s): Kurosawa S, Shimomura Y, Tachibana T, Ishiyama K, Ota S, Kobayashi T, Uchida N, Fukushima K, Ashida T, Matsuoka K, Kanda J, Ichinohe T, Atsuta Y, Murata M, Aoki J.
  • Journal Title: Biology of Blood and Marrow Transplantation Volume: 26 Pages: 1607～1611
  • DOI: 10.1016/j.bbmt.2020.05.013
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Capturing Differential Allele-Level Expression and Genotypes of All Classical HLA Loci and Haplotypes by a New Capture RNA-Seq Method. (2020)
  • Author(s): Yamamoto F, Suzuki S, Mizutani A, Shigenari A, Ito S, Kametani Y, Kato S, Fernandez-Via M, Murata M, Morishima S, Morishima Y, Tanaka M, Kulski JK, Bahram S, Shiina T.
  • Journal Title: Frontiers in Immunology Volume: 11 Pages: 941
  • DOI: 10.3389/fimmu.2020.00941
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Prospective evaluation of alternative donor from unrelated donor and cord blood in adult acute leukemia and myelodysplastic syndrome. (2020)
  • Author(s): Terakura S, Nishida T, Sawa M, Kato T, Miyao K, Ozawa Y, Goto T, Kohno A, Ozeki K, Onishi Y, Fukuhara N, Fujii N, Yokoyama H, Kasai M, Iida H, Kanemura N, Endo T, Ago H, Onizuka M, Iyama S, Nawa Y, Nakamae M, Nagata Y, Kurahashi S, Tomiya Y, Yanagisawa A, Suzuki R, Kuwatsuka Y, Atsuta Y, Miyamura K, Murata M.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplantation Volume: 55 Pages: 1399～1409
  • DOI: 10.1038/s41409-020-0859-8
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation for Post-essential Thrombocythemia and Post-polycythemia Vera Myelofibrosis. (2020)
  • Author(s): Murata M, Suzuki R, Nishida T, Shirane S, Shimazu Y, Minami Y, Mori T, Doki N, Kanda Y, Uchida N, Tanaka M, Ishikawa J, Togitani K, Fukuda T, Ichinohe T, Atsuta Y, Nagamura-Inoue T, Kiyoi H.
  • Journal Title: Internal Medicine Volume: 59 Pages: 1947～1956
  • DOI: 10.2169/internalmedicine.4375-19
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] HSCT for Myelofibrosis in Japan. (2020)
  • Author(s): Murata M.
  • Organizer: The International Congress of BMT 2020
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] Phase I study of cord blood transplantation with intra-bone marrow injection of MSC. (2020)
  • Author(s): Goto T, Murata M, Nishida T, Terakura S, Kamoshita S, Ishikawa Y, Ushijima Y, Adachi Y, Kato K, Hirakawa A, Nishiwaki S, Nishio N, Takahashi Y, Kodera Y, Matsushita T, Kiyoi H.
  • Organizer: 第82回日本血液学会学術集会
• [Presentation] Prospective evaluation of alternative donor from unrelated donor and cord blood in adult AL and MDS. (2020)
  • Author(s): Goto T, Terakura S, Nishida T, Sawa M, Kato T, Miyao K, Ozawa Y, Kohno A, Ozeki K, Onishi Y, Fukuhara N, Fujii N, Yokoyama H, Kasai M, Iida H, Kanemura N, Endo T, Ago H, Onizuka M, Iyama S, Nagata Y, Kurahashi S, Yanagisawa A, Suzuki R, Kuwatsuka Y, Atsuta Y, Miyamura K, Murata M.
  • Organizer: 第82回日本血液学会学術集会