Establishment of a therapeutic method to induce Treg through steroid receptor in organ transplantation.

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K08540
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 田中 友加 広島大学, 医歯薬保健学研究科(医), 准教授 (90432666)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大段 秀樹 広島大学, 医歯薬保健学研究科(医), 教授 (10363061)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 制御性T細胞 / ステロイド / 臓器移植 / 遺伝子多型

Outline of Annual Research Achievements

臓器移植後の拒絶反応の治療には、ステロイドパルスが第一選択として用いられる。移植以外の分野でもステロイドパルス療法は、その免疫抑制効果から経験的に使用されてきたが、免疫機構に対しての明らかなエビデンスは不明な点が多い。本研究では、同種異系（アロ）免疫応答におけるステロイドレセプター（Glucocorticoid receptor; GR）を介したTreg優位性というGRの新たな機能解明と新規治療を提案することを目的として、ステロイドホルモンレセプターを介した制御性T細胞誘導およびアロ免疫制御機構（免疫寛容誘導のメカニズム）を、ヒト末梢血リンパ球を用いてin vitroで解明する。また、肝臓移植において、術後細胞性急性拒絶反応発症率とFOXP3のプロモーター領域の(rs3761548)[3279 A/C]においてA carrierを示す症例は全例ステロイド抵抗性拒絶反応であり、CC homozygote症例は全例ステロイド感受性を示し、FOXP3の遺伝子多型が個々のステロイドパルス感受性と相関することを発見した。そこで、臨床臓器移植における細胞性拒絶反応、抗ドナー特異的抗体（DSA)産生、寛容誘導等制御性T細胞がその病態に関与しうる可能性についてさらに症例解析を重ねるとともに、基礎研究においてもFOXP3遺伝子とステロイドレセプターを介したTreg機能の個体差について検討を行う。これまでに、臨床腎移植症例におけるFOXP3遺伝子解析と臨床所見との相関性を確認した。また、健常人ボランティア末梢血を用いたTreg誘導法についての条件検討を行った。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本研究は、ステロイドホルモンレセプターを介した制御性T細胞誘導およびアロ免疫制御機構（免疫寛容誘導のメカニズム）を、ヒト末梢血リンパ球を用いてin vitroで解明する。まずは、ステロイドパルス療法に使用されるメチルプレドニゾロンステロイドホルモンレセプター刺激が Treg細胞の誘導増殖へ如何に影響するかを、HLAミスマッチ間アロT細胞リンパ球混合試験培養系に添加し、Treg誘導効率とフェノタイプの変化について解析を行った。これらにサイトカイン（IL2, TGF-βなど）を添加しT細胞応答増強させた場合、および2nd MLRによって感作後の抗アロT細胞抑制効果について検討を進めた。臨床腎移植症例における拒絶反応、術後抗ドナー特異的抗体出現率との関係について解析を行った。

Strategy for Future Research Activity

検討数を重ねてステロイドホルモンレセプターを介した制御性T細胞誘導およびアロ免疫制御機構についてシグナル解析等の評価を続ける。また、コルチコイド/ミネラルコルチコイドホルモンレセプターに対するアゴニストを用いて、ステロイドホルモンレセプター刺激が Treg細胞の誘導増殖へ如何に影響するかのin vitro実験を進める。in vitro実験で得られた個体差が、ステロイド受容体を介したFOXP3機能制御におけるFOXP3遺伝子多型により影響を受けるかについて相関性を評価する。さらに、他の遺伝子多型との相乗性を確認するためステロイドレセプター関連遺伝子についても同様に解析を行う。

Causes of Carryover

in vitro実験における、実験系の確立にやや時間を要したため、培養液およびサイトカイン、ステロイドに経費を投じた。実験系がほぼ確立したため、次年度にn数を増やした試薬購入費およびコルチコイド/ミネラルコルチコイドホルモンレセプターに対するアゴニストおよび、抗CD80/86抗体による抗ドナー特異的制御性T細胞を解析するためのレパトア解析に関する費用に使用する。ただし、進捗としては臨床解析が予想より早く進んでおり、進捗に遅れはないと考えている。