2018 Fiscal Year Research-status Report
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18K08892
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
田島 吾郎 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (00437427)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松本 直也 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (50359808)
山野 修平 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (60570538)
梅原 敬弘 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 助教 (60617421)
池松 和哉 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (80332857)
田崎 修 長崎大学, 病院(医学系), 教授 (90346221)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 自然免疫 / パターン解析 / 判別分析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、炎症病態を複数マーカーの発現パターンとして捉えて、パターンを評価指標とする新たな炎症病態評価法を確立することを目的としており、今年度は、これまでの基礎データに加えて、マウス敗血症モデル、広範囲熱傷モデルにおける自然免疫受容体の発現に加えて、その下流のシグナル分子の遺伝子発現パターンでも特徴的変化を示すことを明らかにして、米国集中治療学会で報告した。
C57BL/6マウスを用い、Sham、Cecal Ligation and puncture: CLP、広範囲熱傷モデル(TBSA20%)の3群で、受傷3, 6, 12, 24時間後に全血よりtotal RNAを抽出した。定量RT-PCRで自然免疫受容体（TLR2, TLR4, TLR9, NLRP3, RIG-I）とシグナル分子（MyD88, TRIF, IRF-3, IRF-7, Caspase-1）の遺伝子発現を測定し判別分析で発現パターンを比較した。TLR2, TLR4, NLRP3, MyD88の発現はCLP, Burnにおいて3時間後から有意に上昇した(p＜0.05)。CLPにおいてTLR9は12, 24時間後でSham, Burnより有意に低下(p＜0.05)、IRF-7は有意に上昇した(p＜0.05)。3時間後から各群で特徴的な遺伝子発現パターンを示し、判別分析では3時間後で 判別過誤率6.06%、6時間後からは0%で各病態を判別できた。
受傷早期から感染、組織損傷とも病態特異的な自然免疫系の反応が惹起されていると考えられ、自然免疫系のパターン解析により全身性炎症反応の病態を判別できる可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
動物実験においては、敗血症、熱傷モデルにおける、白血球での遺伝子発現の測定とパターン解析はできたが、臨床業務の多忙、マンパワー不足のため、細胞内蛋白発現の測定系が確立できておらず、蛋白レベルでの発現パターンの解析ができていない。また、遺伝子組み換え動物の導入が遅れており、アレルギーモデルの遺伝子、蛋白発現とも測定できていない状況である。臨床検体を用いた研究でも、同様の理由によりヒト検体での測定系が確立できていないことと、発熱患者の検体が十分に集まっていないことにより、研究が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、遺伝子発現についてはアレルギーモデルでの経時的データも加えて、病態特異的な発現パターンの同定と、病態判別のための解析をさらに進めていく。蛋白発現については自然免疫受容体、シグナル分子群の細胞内染色法の技術的な問題点を解決して、測定系の確立を目指す。また、発熱患者の末梢血白血球における自然免疫受容体、シグナル分子群の発現についても、測定系を確立するとともに、ある程度検体が集まれば、動物モデルと同様な解析が可能かどうか評価するための基礎データの収集まで進める予定である。
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| Causes of Carryover |
細胞内蛋白発現の測定系の確立、遺伝子組み換え動物の導入、発熱患者の末梢血検体での測定が遅れており、実験が進まなかったため、次年度使用額が生じた。次年度はアレルギーモデルの遺伝子、蛋白発現も含めて、RNA抽出キット、PCRのプライマー、蛋白の細胞内染色の測定系確立のための抗体、消耗品、キットに使用する予定である。また、成果発表のための学会費、旅費にも使用予定である。
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Research Products
(2 results)
