2020 Fiscal Year Research-status Report
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18K08892
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
田島 吾郎 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (00437427)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松本 直也 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 客員研究員 (50359808)
山野 修平 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (60570538)
梅原 敬弘 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 助教 (60617421)
池松 和哉 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (80332857)
田崎 修 長崎大学, 病院(医学系), 教授 (90346221)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 全身性炎症 / 遺伝子 / パターン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までの研究で、病態別に自然免疫受容体の遺伝子発現に特徴的なパターンがあることを報告し、今年度は遺伝子発現のパターンに基づいた解析が、重症度に関係なく病態を判別できることを明らかとして、2020年の米国外傷学会で口演発表した。
C57BL/6マウスを用いて、Sham、重症度の異なる炎症モデルとして、敗血症モデルは18Gと25Gの針を使用した盲腸結紮穿孔モデル（Cecal Ligation and puncture: CLP）、広範囲熱傷モデルは熱傷面積（Total Body Surface Area：TBSA）20%と10%の5群を作製し、受傷から24時間後に、全血からRNAを抽出し、定量的RT-PCRを用いて遺伝子発現を測定した。TLR2、TLR4、NLRP3およびMyD88の遺伝子発現は、Shamと比較してすべてのグループで有意に増加した（p <0.05）。TLR9の値は、Shamと比較して両方のCLPグループで有意に減少した（p <0.05）。全ての測定データは、相対値としてパターン化するため、パラメーターの最大平均値で割った値にスケーリングして、実測値とパターン化した値でそれぞれ正準判別分析（CDA）を施行し、重症度に関係なく、病態に応じて診断率を比較した。CDAでは、パターン化した値を用いた方が、実測値と比較して、より明確に病態を判別すること可能で、Sham（71.6% vs 99.8%）と、Burn（72.0% vs 98.3%）では有意に判別率が高かった（p <0.05）。
遺伝子発現の実測値を比較するよりも、パターンとして比較する方が、重症度に関係なく病態を識別可能であることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
動物実験においては、敗血症、熱傷モデルにおける遺伝子発現のパターン解析と、重症度と関係なく病態をパターンで判別できることを明かとした。しかし、臨床業務の多忙、マンパワー不足のため、細胞内蛋白発現の測定系が確立できておらず、蛋白レベルでの発現パターンの解析ができていない。臨床検体を用いた研究では、ヒト検体での測定系の確立は進んで測定できるようになったが、上記臨床業務の多忙と、発熱患者の検体が十分に集まっていないことにより研究が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在、病態特異的な遺伝子発現パターンの解析を、さらに重症度、時系列を加えて、測定中であり、これまでの結果の正当性を追認する。蛋白発現については自然免疫受容体、シグナル分子群の細胞内染色法の技術的な問題点を解決して、測定系を確立する。また、発熱患者の末梢血白血球における自然免疫受容体、シグナル分子群の遺伝子発現については、測定系は確立したので、臨床検体を集めて、動物モデルと同様に解析を進める予定である。
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| Causes of Carryover |
発熱患者の臨床検体を用いた測定が遅れていることと、蛋白発現の測定系の確立、遺伝子組み換え動物の導入の実験が進まなかったため、次年度使用額が生じた。臨床検体での測定系は確立されたため、最終年度は臨床検体を用いた遺伝子発現の測定をすすめて、動物実験ではアレルギーモデルの遺伝子、蛋白発現も含めて、RNA抽出キット、PCRのプライマー、蛋白の細胞内染色の測定系確立のための抗体、消耗品、キットに使用する予定である。また、成果発表のための学会費、旅費にも使用予定である。
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