2021 Fiscal Year Research-status Report
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18K08892
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
田島 吾郎 長崎大学, 病院(医学系), 准教授 (00437427)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松本 直也 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 客員研究員 (50359808)
山野 修平 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (60570538)
梅原 敬弘 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 助教 (60617421)
池松 和哉 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (80332857)
田崎 修 長崎大学, 病院(医学系), 教授 (90346221)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 全身性炎症 / 遺伝子 / パターン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までの研究で、病態別に自然免疫受容体の遺伝子発現に特徴的なパターンがあること、また遺伝子発現のパターンに基づいた解析が、重症度に関係なく病態を判別できることを明らかとして、2020年の米国外傷学会で口演発表した。今年度は各炎症病態を特徴的に反映するマーカーを客観的に網羅的に探索するため次世代シークエンサー解析（NGS）を施行した。C57BL/6マウスを用いて、Sham、重症度の異なる炎症モデルとして、敗血症モデルは18Gと25Gの針を使用した盲腸結紮穿孔モデル（Cecal Ligation and puncture: CLP）、広範囲熱傷モデルは熱傷面積（Total Body Surface Area：TBSA）20%と10%の5群を作製し、受傷から24時間後に、全血からRNAを抽出し、total RNA 1000ngからシークエンスライブラリの作成を行い（TruSeq Stranded mRNA）、NGSはIllumina社Miseqにてシークエンスを行った。バイオインフォマティクス解析はStrand NGS（Strand Life Sciences Pvt. Ltd., Bangalore, India)を用いて解析を行った。NGSの結果、sham群と比較してBurn10では125、Burn30では112、CLP25Gでは124、CLP18Gでは123のmRNAが2倍以上に発現していることがわかった。sham群と比較してBurn10では32、Burn30では10、CLP25Gでは22、CLP18Gでは21のmRNAの発現が1/2以下に低下していた。それらの遺伝子に対してGene Ontology解析、Pathway解析を行った結果、炎症反応や細胞の遊走に関わる多くの遺伝子発現が変動しており、新たな病態判別のマーカーの候補となる遺伝子群が明らかとなった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
動物実験においては、敗血症、熱傷モデルにおける遺伝子発現のパターン解析と、重症度と関係なく病態をパターンで判別できることを明かとして、さらに病態ごとのNGSによる網羅的な遺伝子解析を施行した。しかし、臨床業務の多忙、マンパワー不足のため、蛋白レベルでの発現パターンの解析ができていない。臨床検体を用いた研究では、ヒト検体での測定系は確立したが、上記臨床業務の多忙と発熱患者の検体が十分に集まっていないことにより研究が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでに自然免疫に関わる特定の遺伝子を用いた病態特異的な遺伝子発現パターンを明らかにしたが、今後はNGSで網羅的に探索したより客観的な病態に特徴的なマーカーを用いたパターン解析を行っていく予定である。また、蛋白発現については細胞内染色法の技術的な問題点を解決して測定系を確立する。また、臨床検体の収集を進めて、発熱患者の末梢血白血球における遺伝子発現について、動物モデルと同様に解析を進める予定である。
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| Causes of Carryover |
発熱患者の臨床検体を用いた測定が遅れていることと、蛋白発現の測定系の確立、遺伝子組み換え動物の導入の実験が進まなかったため、次年度使用額が生じた。臨床検体での測定系は確立されたため、最終年度は臨床検体を用いた遺伝子発現の測定をすすめて、動物実験ではアレルギーモデルの遺伝子、蛋白発現も含めて、RNA抽出キット、PCRのプライマー、蛋白の細胞内染色の測定系確立のための抗体、消耗品、キットに使用する予定である。また、成果発表のための学会費、旅費にも使用予定である。
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Research Products
(1 results)
