The effect of the low ND1 expression in renal cancer cells on the intracellular ROS, tumor metastasis and proliferation

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K09180
• Research Institution: Tokai University
• Principal Investigator: 金 伯士 東海大学, 医学部, 助教 (70609338)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小見山 智義 東海大学, 医学部, 准教授 (60439685) ; 宮嶋 哲 東海大学, 医学部, 教授 (90245572)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 腎細胞癌 / ND1 / ROS

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、腎細胞癌ND1変異と非再発生存率の相関をみた臨床的検討、腎細胞癌手術検体におけるND1遺伝子発現量およびタンパク発現量をみた基礎的検討を基盤として、腎細胞癌の増殖、転移および癌細胞内のROS蓄積におけるND1サブユニットの役割の解明を目的とする。前年度は、サンガーシークエンスおよびリアルタイムPCRを行い、５種類の細胞株のうちRCC4/vector alone, RCC4/VHL, ACHN, Caki2に遺伝子変異を認め、RCC4/vector aloneとRCC４/VHLにT3398CおよびA3796Gの共通の変異を認め、ACHNとCaki2にA3480Gの共通の変異を認めた。リアルタイムPCRの結果では、ACHNの遺伝子発現量が最も多く、Caki2の発現量が最も少ないことが分かった。残りの細胞株に関しては同程度の発現量であった。本年度は、RCC4/vector aloneとRCC4/VHL２つの細胞株を用いて、siRNAによるND1遺伝子のノックダウンを開始した。ND1ノックダウンの条件設定に難渋しているが、ノックダウン株で細胞増殖が活性化している所見を得た。また、ArrayScanを用いたROS測定の条件設定も同時進行で行っている。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

ND1 siRNAの条件設定に難渋しており、次年度への課題となる。ROS測定の実験系はほぼ確立されており、siRNAの安定化が研究の律速段階となる。

Strategy for Future Research Activity

ND1遺伝子のノックダウンの最適条件を決定し、ノックダウン前後でのND1遺伝子および蛋白発現量比較と細胞内ROSの計測を行う。また、ND1遺伝子ノックダウンが細胞増殖能へ与える影響を観察する。

Causes of Carryover

実験条件の設定に難渋したため繰越金が発生した。次年度の実験および成果発表で繰り越し分も含めて使用予定である。