2020 Fiscal Year Annual Research Report
Involvement of TRP channels in the development of periodontitis
| Project/Area Number |
18K09566
|
|---|
| Research Institution | University of Shizuoka |
|---|
Principal Investigator |
内田 邦敏 静岡県立大学, 食品栄養科学部, 准教授 (20581135)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
八田 光世 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 教授 (30344518)
吉住 潤子 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 助教 (40596376)
山崎 純 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (50230397)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
|
| Keywords | 口腔上皮 / 細胞増殖 / バリア機能 / 歯周病菌 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
ヒト口腔上皮細胞株を用いた３次元培養モデルを構築し、歯周病原菌の１つであるPorphyromonas gingivalis（Pg菌）の死菌と共培養することで、in vitro歯周病モデルを作製した。まず、ヘマトキシリン・エオシン染色を行い形態を観察した結果、Pg菌群において上皮層の厚みが増大していたが、細胞間並びに層間に多くの間隙が認められた。細胞間接着の機能を経上皮電気抵抗により評価した結果、Pg菌群で抵抗値が有意に低下した。このモデルの上皮細胞を摘出した後にRNAを抽出し、マイクロアレイ解析を行った。その結果、細胞増殖に関連する遺伝子群の発現量が上昇していた。リアルタイムRT-PCR法を用いて遺伝子の発現量を検討した結果、細胞周期の進行に中心的な役割を果たすCyclinを負に調節する因子であるCdkn1aが有意に低下していた。Tight junctionに関与する遺伝子の発現量には有意な差が認められなかったが、E-cadherinタンパク質発現はPg菌群において有意に低下していた。細胞増殖のマーカーであるKi67陽性細胞数はPg菌群において有意に増加していた。また、細胞増殖マーカーであるKi67についても抗体を用いて免疫組織染色を行った結果、Ki67陽性細胞数がPg菌群で有意に増加していた。また、Pg菌群に対するLPS受容体（TLR４）阻害剤の作用を検討した結果、TLR4阻害薬はPg菌による上皮層の肥厚を改善する傾向がみられた。
ヒト口腔上皮細胞株にRT-PCR法並びにカルシウムイメージング法を用いてTRPチャネルの発現を解析した結果、TRPV3及びTRPV4の発現を認めた。Pg菌を共培養した3次元モデルに対する非選択的TRPチャネル阻害剤の作用を検討した結果、Pg菌群でみられた上皮層の厚みの増大が阻害剤によって抑制された。
|
