2018 Fiscal Year Research-status Report
歯周病の病態を反映する唾液中microRNAの探索
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18K10026
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
藤森 浩平 岡山大学, 大学病院, 医員 (70813624)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森田 学 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (40157904)
米田 俊樹 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (60756071)
江國 大輔 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (70346443)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | microRNA / バイオマーカー / 歯周病 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
歯周病は多くの国民が罹患する歯科疾患のひとつであり、発症の予防と早期診断が重要であるとされる。近年では歯周病を反映するバイオマーカーの探索に関する研究が盛んに行われているが、歯肉などの歯周組織を用いた研究報告は多いものの、唾液を用いた報告は少ない。また、ヒト生体からの歯肉組織の採取は負担が伴う一方で唾液の採取による生体への負担は非常に軽度であり、簡便である。体液中に存在するバイオマーカーの一種としてmicroRNAは注目されており、多くの疾患の発症や重症化に関わる遺伝子発現を制御していることが明らかにされている。歯周病についても、歯周組織由来のmicroRNAが関与している可能性が示唆されているが、唾液中のmicroRNAについては不明な部分が多い。唾液中において、microRNAはエキソソームのような小胞に包含されることで分解酵素によって分解されず、安定した状態で存在している。我々は歯周病を反映するバイオマーカーとして、唾液エキソソーム中のmicroRNAの発現について着目した。
当院の患者を対象として、歯周状態の検査を行ったのちに健常群と歯周病群に分類し、各患者から唾液サンプルを採取した。エキソソーム中に含まれている安定した状態のmicroRNAを抽出し、逆転写Real-time PCRを行い、microRNAの発現についての分析を行った。その結果、特定のmicroRNA（hsa-mir-381-3p）が歯周病群において有意に発現が上昇しており、また歯周ポケットの深さと正の相関関係があることを明らかにすることができた。また、その研究成果の一部をまとめたものを学術誌に投稿し、掲載されるに至った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2018年度では、歯周病を反映するバイオマーカーとしてのmicroRNA探索のための被験者のリクルートと、唾液サンプルからのmicroRNAの抽出が主な目標であった。患者の同意・協力が予想以上に得られたため、スムーズに実験に取り組むことができたことが進展できた要因であると考える。また、抽出した試料を用いて1次分析を実施したところ、おおむね予想通りの結果を得ることができた。そこで、2019年度に予定していたより精度の高い2次分析を一部前倒しで実施することとした。サンプル中の遺伝子発現において2倍以上の増加または0.5倍以下の減少が確認できたmicroRNA4種類について2次分析を行ったところ、歯周病群で有意に増加しているmicroRNAを1種類（hsa-mir-381-3p）確認することができた。各種統計解析の結果、2019年度末までに明らかにする予定であった、特定のmicroRNAの発現が歯周病の状態を反映するバイオマーカーとして有効である可能性があることを示すことができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の追加実験において、2018年度で特定できたmicroRNA（hsa-mir-381-3p）が細胞内でどのような役割を果たしているのかについて明らかにする予定である。そのために、ヒト歯周組織由来の各種培養細胞にmicroRNAの添加を行い、細胞内でのmRNAの発現や炎症性サイトカインの分泌の変化について確認を行うことを計画している。特徴的な結果が得られた場合や時間的な余裕が生じた場合は、当初の予定に加えてさらに追加の実験も行う。具体的には、歯周病菌を各種ヒト細胞に感染させ、炎症が生じている細胞へのmiRNAの添加や、inhibitor（阻害物質）を添加した場合の炎症状態の変化を確認することを計画している。
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| Causes of Carryover |
2018年度の研究経費は105767円の残金となり、すべて研究にかかる経費として適切に使用した。試薬の購入は数万円、数十万円単位と高額であることが多く、端数で生じた残金として妥当な金額であると考える。次年度以降の研究経費は各種培養細胞や試薬の購入に使用する予定である。本実験は生きた細胞を扱う実験デザインのため、飼育上のトラブルに備える必要もある。2018年度の残金は次年度以降の実験と解析の費用に充てるため、繰り越して使用する予定である。
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Research Products
(1 results)
