Analysis of relationship between free-living amoebae and amoeba-resistant bacteria in living environment

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K10039
• Research Institution: Osaka Institute of Public Health
• Principal Investigator: 枝川 亜希子 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 衛生化学部, 主任研究員 (80321941)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮本 比呂志 佐賀大学, 医学部, 教授 (40229894)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 自由生活性アメーバ / アメーバ内寄生病原細菌 / レジオネラ / 生活環境 / 水たまり

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、生活環境に生息する自由生活性アメーバとアメーバ内寄生病原細菌の分布実態を明らかにし、関連性を解明する。令和元年度は、降雨後の水たまりから40試料を採取した。これらの試料について、自由生活性アメーバを培養法で検出した結果、27試料（67.5％）が陽性であった。アメーバの検出率は、夏季に高く、気温の影響を受けることが示された。アメーバ種は、Naegleria、Vannellaなどを検出した。アメーバ内寄生病原細菌として、レジオネラ属菌を培養法で検出した結果、不検出であった。昨年度までの検体を合わせると、降雨後の水たまり計98試料のうち、自由生活性アメーバは76試料（77.6％）、レジオネラ属菌は培養法で1試料(1.0%)が陽性であった。これらの試料について、細菌類をアメーバの中で増殖させてから検出するアメーバ共培養法を並行し、試料を保存した。保存試料およびアメーバ共培養法保存試料について、リアルタイムPCR法をやPCR法およびシーケンスなど遺伝子学的手法を用いて解析を進めている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

研究計画に従い、水たまり試料から自由生活性アメーバなどの検出を実施した。試料採取を優先に行ったため、当初予定していた試料数以上の採取ができており計画以上に進展しているが、遺伝子解析がやや遅れているため、全体としてはおおむね順調に進展していると考えている。

Strategy for Future Research Activity

保存試料およびアメーバ共培養法保存試料からDNA抽出を行い、リアルタイムPCR法やPCR法およびシーケンスなどを用いて遺伝子解析を行う予定である。これらの結果から、検出率の季節変動、アメーバ共培養法実施の有無による比較等を行い、自由生活性アメーバとレジオネラ属菌の関連性について解析する。

Causes of Carryover

今年度は試料採取を優先し、主に培養法を実施した。そのため、予定していた遺伝子学的手法を用いた解析は次年度以降に行うことに変更した。この変更に伴い、次年度使用額が生じている。研究計画を順次進めているところであり、次年度使用額は、遺伝子関連試薬や実験に必要な消耗品類に使用する予定である。