2008 Fiscal Year Annual Research Report
CCNファミリーの新規シグナルコンダクターとしての包括的分子基盤の解明とその応用
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19109008
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
滝川 正春 Okayama University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (20112063)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
久保田 聡 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (90221936)
服部 高子 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (00228488)
西田 崇 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (30322233)
青山 絵理子 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (10432650)
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| Keywords | CCNファミリー / CCN2 / CTGF / シグナル伝達 / 軟骨 / 骨 / 再生 / BMP-2 / 分子間相互作用 |
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| Research Abstract |
(1)CCN2による細胞外のシグナル伝達調節関連分子情報の総合解析とその検証
計画に従い、(1)タンパク質アレイを用いた8000種を超えるヒトタンパク質とCCN2との分子間相互作用の解析データ(2)Phage Display SystemによるCCN2各モジュールに特異的に結合するペプチド配列データ(3)Yeast Two-hybridスクリーニングによるCCN2結合タンパク質を解析し、BMPおよびFGFシグナルに関連する複数の分子を当面の解析対象として選択した。これら分子はいずれも骨、軟骨形成に重要な役割を果たすとされるものである。現在までの解析ではBNP-2、およびFGFリガンドの一種がCCN2に強く結合することを固相結合法にて確認済みである。
(2)CCN2とその関連分子との分子間相互作用のカイネティクス解析
上記のBMP-2ならびにFGFリガンドについては、すでに表面プラズモン共鳴法によるカイネティクス解析を実施し、解離定数などのパラメータを決定した。
(3)CCN2及び関連分子の加in vitroにおける機能検証ほか
(1)BMP-2とCCN2を混合して軟骨細胞に作用させると、両者の増殖促進効果は抑制され、プロテオグリカン合成など分化促進効果は相加的に上昇した。
(2)CCN2が軟骨細胞において低酸素下でHif1αを介してVEGFの発現を制御していることを明らかにした。
(3)メカニカルストレスが軟骨細胞においてCCN2の発現を誘導することを見いだした。
(4)CCN2が骨の再生や耳介軟骨の再生に重要な働きをしていることを明らかにした。
(5)CCN2が幹細胞のヒドロキシアパタイトへの接着を促進することにより骨再生を促進することを見いだした。
(6)CCN2のmRNAの3'-UTRに存在するcis-エレメントに結合してmRNAを不安定化させる40-KDaのタンパクがヌクレオホスミンであることを明らかにした。
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