2008 Fiscal Year Annual Research Report
豚コレラウイルスの病原性に関与する自然免疫回避機構の解明
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19380170
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
迫田 義博 Hokkaido University, 大学院・獣医学研究科, 准教授 (40333637)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
青木 博史 日本獣医生命科学大学, 獣医学部, 講師 (10440067)
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| Keywords | 豚コレラウイルス / 病原性 / 自然免疫 / ペスチウイルス / 宿主 |
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| Research Abstract |
豚コレラウイルスの病原性に関与すると考えられる自然免疫回避機構を分子レベルで解明することを目的とし、ウイルス非構造蛋白N^<pro>の点変異体や欠損体を作製し、1型IFNの産生抑制に必須なアミノ酸領域を決定した。その結果、1型IFNの産生抑制に必須なアミノ酸は、比較したウイルス株の組み合わせにより大きく3パターンに分けられ、(1)C112Rの変異、(2)D136Nの変異、(3)H5Y、L8F、P17Sの3つのアミノ酸の変異のいずれかであることがわかった。また、これらの3つのパターンのアミノ酸変異を有するN^<Pro>のIFN-β遺伝子プロモーター活性に及ぼす影響をルシフェラーゼアッセイによって解析したところ、これらの変異を有するN^<pro>蛋白はインターフェロン調節因子(IRF)-3の働きを左右し、IFN-β遺伝子プロモーターの活性を調節することがわかった。なお、これらのアミノ酸変異の場所は、N^<pro>が有するプロテアーゼの活性に必須な領域とは異なっていた。さらに、特定されたIFN-βのプロモーター活性の抑制に必須なN^<pro>上のアミノ酸領域のみを細胞内で発現させ、細胞内のIRF-3、IRF-7、IPS1とウイルス蛋白N^<pro>の発現量や細胞内局在をウェスタンブロット法と蛍光抗体法により解析したが、特定されたN^<pro>上のアミノ酸領域が細胞側因子と直接的に結合することは証明出来なかった。以上より、豚コレラウイルスの自然免疫回避機構に必須なアミノ酸領域が特定され、この領域はN^<pro>が有するプロテアーゼ活性とは独立した領域であることがわかった。
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