2008 Fiscal Year Annual Research Report
微小血管ネットワークを有する高次肝組織の生体内での再構築
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19390340
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
小池 直人 Yokohama City University, 医学研究科, 客員研究員 (50301081)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
谷口 英樹 横浜市立大学, 医学研究科, 教授 (70292555)
鄭 允文 横浜市立大学, 医学部, 助教 (80404995)
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| Keywords | 血管 / 肝臓 / 組織再構築 / 再生医学 |
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| Research Abstract |
ヒト血管内皮細胞(HUVEC)・ヒト骨髄由来間葉系幹細胞(hMSC)により完全ヒト型微小血管ネットワークを再構築が可能であるか否かを検証し、その構築過程を定量化するとともに、さらに、血管ネットワーク内でのヒト肝組織の再構成を試みた。クラニアルウインドウ法を用いて、EGFP(enhanced green fluorescence protein)遺伝子で標識したHUVECとhMSCを前年同様Rat Tail Type I Collagen-Gelに共に包埋することによりヒト型血管の成熟過程をライブにて定量した。移植後2週目には構築された血管の一部で宿主からの血流が認められ、移植後8週目では構築が維持された血管ネットワークほぼ全てで血流が確認された。hMSCを移植しないHUVECのみの系では構築された血管ネットワークは未熟で1週間程度で退縮した。hMSCにKO(Kusabira Orange)遺伝子を導入し、EGFP-HUVECとともに蛍光顕微鏡下で可視化できるようにしたところ、KO-hMSCはHUVECからなる微小血管を取り囲むように遊走し、血管壁細胞として血管ネットワークの成熟安定化に関与していることが示唆された。構築された微小血管ネットワークの血管密度は、移植後5週目から移植後8週目まで単位面積の30%(SE±0.5%)で維持され、平均血管径は直径8μm(SE±0.45μm)で維持された。移植後8週目の組織について血管内皮細胞マーカー(ヒトPECAM-1)と平滑筋マーカー(α-SMA)の発現を免疫染色にて検討したところ、再構成された血管では管腔を形成するヒトPECAM-1陽性細胞がα-SMA陽性細胞に囲まれて存在し、HUVECと壁細胞に分化したhMSCより構成されていることが証明された。HUVEC, hMSCと更にKOを遺伝子導入したヒト胎児肝臓細胞を共に培養したところ、移植後5週目の組織解析の結果、血管様構造とともに、一部で胆管様構造、サイトケラチン陽性細胞から構成される細胞クラスターやアルブミン陽性細胞集団が多数観察され、血管構造を有する肝組織が再構成されたと考えられた。今後、安定した肝組織の構築とその成熟過程の定量化を試みる予定である。
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[Journal Article] Hepatic hilar resection for hilar cholangiocarcinoma based on a reclassification.2008
Author(s)
Cho A, Asano T, Yamamoto H, Nagata M, Takiguchi N, Kainuma O, Souda H, Gunji H, Miyazaki A, Nojima H, Ikeda A, Matsumoto I, Ryu M, Koike N
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Journal Title
Hepatogastroenterology 55
Pages: 1764-1765
Peer Reviewed
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[Presentation] In vivoにおける血管ネットワーク構造を有するヒト高次肝像組織の再構築2009
Author(s)
仲野晶, 藤原綾二, 小池直人, 千葉豊生, 網谷猛, 岡村愛, Dai Fukumura, Rakesh K Jain, 上野康晴, 鄭允文, 谷口英樹
Organizer
第8回日本再生医療学会総会
Place of Presentation
東京
Year and Date
20090305-20090306
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