2008 Fiscal Year Annual Research Report
ネガティブシグナルを誘導する抗アレルギー性IgEの開発
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19790084
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| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
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Principal Investigator |
中村 亮介 National Institute of Health Sciences, 代謝生化学部, 主任研究官 (50333357)
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| Keywords | 免疫化学 / 抗アレルギー薬 / IgE / マスト細胞 / シグナル伝達 |
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| Research Abstract |
前年度までに単離したネガティブシグナル伝達性免疫受容体に対するラツトIgG2b抗体の重鎮および軽鎮可変部の遺伝子に、splice overlapping extention法により、それぞれマウスIgEの重鎮およびκ軽鎮の定常部の遺伝子をin frameでつないだ。これらをGateway LR反応により異なる薬剤耐性マーカーを持つ哺乳動物発現ベクタープラスミドに組み込み、遺伝子配列を確認した。これらのプラスミドを大腸菌の大量培養により増幅し、大量に調製することに成功した。これらをCHO-S細胞に導入して発現させたところ、元のラットIgG2b抗体と同じ抗原特異性を持つマウス化IgEが機能的に発現していることが確認できた。一方、この抗体を用いたマスト細胞レベルでの機能解析を行なうため、抗原となる受容体を安定に発現するラット培養マスト細胞株RBL-2H3細胞を作出することを試みた。マウスマクロファージJ774.1細胞由来のtotal RNAをもとに逆転写を行ない、目的の受容体cDNAを単離し、シークエンスの確認後、LR反応によりGeneticin耐性マーカーを持つ哺乳動物発現ベクタープラスミドに組み込み、大量調製した。これをリニアライズしてRBL-2H3細胞にリポフェクション法により導入し、安定発現株を複数株樹立した。現在、樹立した細胞とIgEを用いた抗アレルギー活性に関する機能解析を行なっている。
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[Journal Article] Effects of developmental hypothyroidism induced by maternal administration of methimazole or propylthiouracil on the immune system of rats2008
Author(s)
Nakamura, R., Teshima, R., Hachisuka, A., Sato, Y., Takagi, K., Nakamura, R., Woo, G. H., Shibutani, M., Sawada, J.
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Journal Title
International Immunopharmacology 7
Pages: 1630-1638
Peer Reviewed
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[Journal Article] Effect of perinatal exposure to the flame-retardant tetrabromobisphenol A on the developing immune system of rats2008
Author(s)
Nakamura, R., Hachisuka, A., Sato, Y., Nakamura, R., Shibutani, M., Sawada, J., Teshima, R.
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Journal Title
Bulletin of National Institute of Health Sciences 126
Pages: 65-70
Peer Reviewed
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[Journal Article] Effect of exposure to decabromodiphenylether on the development of the immune system in rats2008
Author(s)
Teshima, R., Nakamura, R., Nakamura, R., Hachisuka, A., Sawada, J., Shibutani, M.
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Journal Title
Journal of Health Science 54
Pages: 382-389
Peer Reviewed
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