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2021 Fiscal Year Annual Research Report

iPS発がんモデルとゲノム編集スクリーニングによる神経芽腫エピゲノム療法開発

Research Project

Project/Area Number 19H03625
Research InstitutionResearch Institute for Clinical Oncology Saitama Cancer Center

Principal Investigator

上條 岳彦  地方独立行政法人埼玉県立病院機構埼玉県立がんセンター(臨床腫瘍研究所), 臨床腫瘍研究所, 所長 (90262708)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大平 美紀  地方独立行政法人埼玉県立病院機構埼玉県立がんセンター(臨床腫瘍研究所), 臨床腫瘍研究所, 研究員 (20311384)
堺 隆一  北里大学, 医学部, 教授 (40215603)
牛島 俊和  国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, 分野長 (90232818)
Project Period (FY) 2019-04-01 – 2023-03-31
Keywordsエピゲノム / ポリコーム / テロメア異常 / 網羅的解析 / ゲノム編集 / iPS / nural crest cell
Outline of Annual Research Achievements

新規エピゲノム治療開発として、 ポリコーム(PcG)阻害剤の耐性機構の克服に寄与する標的分子を同定するために、ゲノム編集による標的分子の網羅的スクリーニングによって標的分子を同定した。神経芽腫細胞においてPcG遺伝子群であるEZH1, EED, L3MBTL2をCRISPR/Cas9システムによるゲノム編集系およびshRNAでKO/KDした。それぞれの分子が特にMYCN増幅NBにおいて発がん悪性化に重要であることをバイオロジー解析で確認した。これらの系でマイクロアレイによる発現網羅的解析と、ChIPseqによる網羅的なクロマチン修飾解析およびqChIPによる検証によってPcG阻害剤の耐性機構の克服に寄与する標的分子を同定した。
難治性神経芽腫におけるテロメア異常は重要な発がん・悪性化機構である。我々は特にAlternative Lengthen of Telomere: ALTに注目し、この原因分子であるATRXについてCRISPR/Cas9システムによるゲノム編集によってNB細胞においてATRXをKOした。ATRX KOによって、NB細胞でG-quadruplex (G4) structureが形成され、DNA damage誘導が生じた。これに伴いγ-H2AXの増加、ATM, CHK2, p53, p21waf1/cip1の転写促進が起こり、増殖抑制の原因と考えられ、これはマイクロアレイによる発現網羅的解析とGSEA解析によって証明された。
また現在NB細胞の起源であると考えられるNeural Crest CellをiPS細胞から誘導する刑を構築し、これに対してCRISPR/Cas9システムによるゲノム編集によってATRX KO系を確立した。さらにCas9/sgRNAsを誘導できるレンチウイルスライブラリーを2種入手し、これらのQCを行いNCCへの感染実験を施行した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

PcG遺伝子群であるEZH1, EED, L3MBTL2をCRISPR/Cas9システムによるゲノム編集系等で不活化した。
EEDの標的としてRARB, NTRK1の脱抑制と、これらのプロモーター領域へのEZH2およびH3K27me3 ChIPseqによる結合を確認して標的分子として同定した。さらにEED阻害剤EED226とHDACi SAHAの相乗的な増殖抑制効果を明らかにし、MYCN増幅難治性NBの治療法開発に向けたデータを得た。本研究はEuropean J Cell Biologyに受理された。
EZH1の標的としてがん遺伝子群TYMSとPOLA2を同定した。TYMSは5-FU代謝を行うthymidylate synthetaseをコードしており、EZH1がNB細胞の5-FU抵抗性に関与することが示唆された。Cancer Science誌に投稿し、revise中である。
L3MBTL2の標的を発現網羅的解析と網羅的ChIPseqおよびqChIP検証によってL3 KO細胞で共通に脱抑制し、PRC1.6が発現抑制に関与する遺伝子を同定した。これらは神経芽腫のがん抑制遺伝子NRIP3とBRME1であった。本研究は現在Oncogenesis誌 review中である。
難治性NBにおけるテロメア異常は重要な発がん機構であり重要な治療標的である。我々は特にAlternative Lengthen of Telomere: ALTに注目し、この原因分子であるATRXについて注目しCRISPR/Cas9システムによるゲノム編集によってATRXをKOした。ATRX KOによるG4 structure形成とその原因としてG4-resolving helicases FANCD2発現抑制を見出した。本研究はOncogenesis (2021) 10:73として掲載された。

Strategy for Future Research Activity

現在EZH1研究は、EZH1 KDによってNB細胞にアポトーシスが誘導され、この分子機構解析としてTYMSとPOLA2を同定し、EZH1によるこれらの転写促進を見出した。Cancer Scienceに投稿し、revise中であり、受理に向けて実験を追加していく。
現在L3MBTL2研究は、L3MBTL2がPRC1.6分子としてMYCN増幅NB細胞においてがん抑制遺伝子群の発現を抑制し、細胞恒常性の維持に関わることを見出した。現在Oncogenesis review中であり、受理に向けて実験をさらに行う。
NB細胞の起源であると考えられるNeural Crest Cell: NCCをiPS細胞から誘導する系を構築している。今年度はNCCをさらにCranial NCCとTrunk NCCの2種に分化して遺伝子導入を効率的に行う系を構築する。NCCに対してCRISPR/Cas9システムによるゲノム編集によってATRX KO系を確立している(未発表)。この系でのATRX KO/p53変異細胞から形質転換を行い、この形質転換株でテロメア異常解析(Telomere長解析、ALT解析、TERT定量など)を行い、テロメア異常検出株でゲノム・エピゲノムの網羅的解析をWES, WGS, RNAseq, DNA methyl化アレイ、ChIPseqで行う。これによって難治性神経芽腫におけるテロメア異常の1つで治療標的として注目されているALTの分子機構を解明し、治療法開発に向けて基盤を構築する。
Cas9/sgRNAsを誘導できるレンチウイルスライブラリーを2種入手しており、これらのQCを行いNCCへの感染実験を施行している。今年度はこの系の構築と感染・スクリーニング実験を行い、新規エピゲノム治療開発として ポリコーム阻害剤の耐性機構の克服に寄与する標的分子を同定する。

  • Research Products

    (10 results)

All 2022 2021

All Journal Article (7 results) (of which Int'l Joint Research: 6 results,  Peer Reviewed: 7 results,  Open Access: 6 results) Presentation (3 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results)

  • [Journal Article] Infantile Stage M Neuroblastoma With 11q Deletion, Mimicking Stage MS2022

    • Author(s)
      Yoshimoto Suzuki Yuri、Yamanaka Junko、Miyazaki Osamu、Nozawa Kumiko、Ohira Miki、Kamijo Takehiko、Shichino Hiroyuki
    • Journal Title

      Journal of Pediatric Hematology/Oncology

      Volume: 44 Pages: e779~e781

    • DOI

      10.1097/MPH.0000000000002398

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Platelet-to-Lymphocyte Ratio Predicts the Efficacy of Pembrolizumab in Patients With Urothelial Carcinoma2022

    • Author(s)
      KURASHINA RYO、ANDO KIYOHIRO、INOUE MASAHARU、IZUMI KEITA、MARUYAMA RIKO、MITANI KOUKI、TAKENOBU HISANORI、HARUTA MASAYUKI、IIZUKA TOSHIHIKO、KAMIJO TAKEHIKO、KAGEYAMA YUKIO
    • Journal Title

      Anticancer Research

      Volume: 42 Pages: 1131~1136

    • DOI

      10.21873/anticanres.15576

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Retrospective Analysis of INRG Clinical and Genomic Factors for 605 Neuroblastomas in Japan: A Report from the Japan Children’s Cancer Group Neuroblastoma Committee (JCCG-JNBSG)2021

    • Author(s)
      Ohira Miki、Nakamura Yohko、Takimoto Tetsuya、Nakazawa Atsuko、Hishiki Tomoro、Matsumoto Kimikazu、Shichino Hiroyuki、Iehara Tomoko、Nagase Hiroki、Fukushima Takashi、Yoneda Akihiro、Tajiri Tatsuro、Nakagawara Akira、Kamijo Takehiko
    • Journal Title

      Biomolecules

      Volume: 12 Pages: 18~18

    • DOI

      10.3390/biom12010018

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] FGFR2 loss sensitizes MYCN‐amplified neuroblastoma CHP134 cells to CHK1 inhibitor?induced apoptosis2021

    • Author(s)
      Ando Kiyohiro、Ohira Miki、Takada Ichiro、C?zares‐Ordo?ez Verna、Suenaga Yusuke、Nagase Hiroki、Kobayashi Shinichi、Koshinaga Tsugumichi、Kamijo Takehiko、Makishima Makoto、Wada Satoshi
    • Journal Title

      Cancer Science

      Volume: 113 Pages: 587~596

    • DOI

      10.1111/cas.15205

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Loss of p53 suppresses replication stress-induced DNA damage in ATRX-deficient neuroblastoma2021

    • Author(s)
      Akter Jesmin、Katai Yutaka、Sultana Parvin、Takenobu Hisanori、Haruta Masayuki、Sugino Ryuichi P.、Mukae Kyosuke、Satoh Shunpei、Wada Tomoko、Ohira Miki、Ando Kiyohiro、Kamijo Takehiko
    • Journal Title

      Oncogenesis

      Volume: 10 Pages: -

    • DOI

      10.1038/s41389-021-00363-6

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Frequent breakpoints of focal deletion and uniparental disomy in 22q11.1 or 11.2 segmental duplication region reveal distinct tumorigenesis in rhabdoid tumor of the kidney2021

    • Author(s)
      Haruta Masayuki、Arai Yasuhito、Okita Hajime、Tanaka Yukichi、Takimoto Tetsuya、Kamijo Takehiko、Oue Takaharu、Souzaki Ryota、Taguchi Tomoaki、Kuwahara Yasumichi、Chin Motoaki、Nakadate Hisaya、Hiyama Eiso、Ishida Yasushi、Koshinaga Tsugumichi、Kaneko Yasuhiko
    • Journal Title

      Genes, Chromosomes and Cancer

      Volume: 60 Pages: 546~558

    • DOI

      10.1002/gcc.22952

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] How Do Telomere Abnormalities Regulate the Biology of Neuroblastoma?2021

    • Author(s)
      Akter Jesmin、Kamijo Takehiko
    • Journal Title

      Biomolecules

      Volume: 11 Pages: 1112~1112

    • DOI

      10.3390/biom11081112

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] A pioneer factor CDX1 modifies developmental pathway in neuroblastoma cells2021

    • Author(s)
      Hisanori Takenobu、 Ryuichi Sugino、Masayuki Hruta、Miki Ohira, Takehiko Kamijo
    • Organizer
      The 80th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] PRC1.1 targets a potential tumor suppressor gene BTG2 in neuroblastoma2021

    • Author(s)
      Shunpei Satoh, Mariko Hasegawa, Ryuichi Sugino, Masayuki Hruta, Miki Ohira, Takehiko Kamijo
    • Organizer
      The 80th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Development of a chondroblastic osteosarcoma model from iPSC-based neural crest cells2021

    • Author(s)
      Kyosuke Mukae1, Hisanori Takenobu1, Hiroaki Kanda2, Miki Ohira1, Yuki Endo1, Masayuki Haruta1, Ryuichi Sugino1, Shunpei Satoh1, Junya Toguchida3, 4, Kenji Osafune4, Tatsutoshi Nakahata4, Takehiko Kamijo1
    • Organizer
      The 80th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2024-12-25  

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