2019 Fiscal Year Research-status Report
Identification of novel bovine paternally expressed imprinted genes
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19K06368
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture and Technology |
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Principal Investigator |
金田 正弘 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (80469840)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ウシ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ウシの細胞を入手し，DNAメチル化阻害剤添加によるインプリント遺伝子の発現解析を行った。入手した細胞はMDBK（ウシ腎由来細胞），CKT-1（子牛腎由来細胞），KU-1（ウシＢ細胞白血病細胞株，白血病細胞非作成株），KU-17（ウシＢ細胞白血病細胞株，白血病細胞作成株），BL312（牛白血病細胞、ウィルス非産生株），CPAE（ウシ肺動脈正常血管内皮細胞），JTC-35（牛卵胞内顆粒層細胞由来細胞株）である。これらの細胞株にDNAメチル化阻害剤である5-aza-dC, Zebularine, RG108をそれぞれ濃度を変えて添加し，4日後の生細胞数，DNAメチル化の状態をbisulfite PCR法により解析した。CKT-1細胞は5-aza-dC 1 uMから有意な生細胞数低下を示したものの，RG108添加では100 uMまで生細胞数低下を示さず，Zebularine添加では100 uMのみで生細胞数の低下を示した。JCT-35細胞では5-aza-dC 10 uM添加での有意な生細胞数の低下を示した。MDBK細胞は5-aza-dC添加で1 uMから，またZebularine添加では10 uMのみ有意な生細胞数の低下を示した。
MDBK細胞において，セントロメ周辺の反復配列であるSatellite I配列のDNAメチル化をCOBRA法により解析したところ，5-aza-dC 1 uM添加からDNAメチル化の大幅な低下が確認された。また，X染色体不活化に関与するXIST遺伝子のプロモーター部分のメチル化も大幅に低下していることが確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
他のインプリント遺伝子や新規に同定された父性発現候補遺伝子についての解析を他の細胞株も用いて行っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は生体材料を入手して行うとともに，様々な細胞株を用いたDNAメチル化阻害剤添加によるDNAメチル化や遺伝子発現の変化を解析し，ウシ新規父性発現遺伝子の同定につなげていきたい。
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| Causes of Carryover |
端数処理
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Research Products
(3 results)
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[Journal Article] Efficacy of primary liver organoid culture from different stages of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) mouse model2020
Author(s)
Elbadawy Mohamed, Yamanaka Megumi, Goto Yuta,Hayashi Kimika,Tsunedomi Ryouichi,Hazama Shoichi,Nagano Hiroaki,Yoshida Toshinori,Shibutani Makoto,Ichikawa Ryo,Nakahara Junta,Omatsu Tsutomu,Mizutani Tetsuya,Katayama Yukie,Shinohara Yuta,Abugomaa Amira,Kaneda Masahiro,Yamawaki Hideyuki,Usui Tatsuya,Sasaki Kazuaki
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Journal Title
Biomaterials
Volume: 237
Pages: 119823～119823
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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