転写と共役した遺伝子座の核内局在ダイナミクスの解析

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K06482
• Research Institution: Yokohama City University
• Principal Investigator: 嶋田 美穂 横浜市立大学, 医学研究科, 客員講師 (50383287)
• Project Period (FY): 2019-03-01 – 2022-03-31
• Keywords: インスレーター / メディエーター / 組換え体たんぱく質 / カラムクロマトグラフィー

Outline of Annual Research Achievements

本年度は、試験管内クロマチン構造変換系によるインスレーターの機能解析のために、必要な組換えタンパク質の調整を行ってきた。まず、インスレーターの構成因子であるCTCFの組換えタンパク質を大腸菌で発現させ、カラムクロマトグラフィーにより精製した。また、インスレーターを起点としてクロマチンループの形成に必須と考えられている転写因子であるメディエーターの精製を行った。HeLa細胞にメディエーターの一因子であるMED26を強制発現させて、カラムクロマトグラフィーにより精製した。また、転写の際にメディエーターと共に機能する伸長因子群も昆虫細胞を用いて、組換え体複合体を精製した。伸長因子群の各構成因子の機能も同時に解析できるように各因子の変異体も作成し、組換え体複合体として精製した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

当初、予定していなかった、伸長因子群の各因子の変異体も作成し、組換え体複合体として精製していたために、時間を取られてしまった。しかし、近年、伸長因子群の各構成因子の機能が徐々に分かってきており、必須なアミノ酸部位も同定されてきた。そのため、各構成因子の機能も同時に解析できるように各因子の変異体も同時に精製することを決めた。これらの変異体を用いることで、より深い解析ができると考えている。

Strategy for Future Research Activity

今後は、現在までに調整した試薬や因子を組み合わせて、インスレーターの転写での機能を解析する。また、1年目で作成したインスレーター領域に変異を加えた細胞株の解析も並行して行う予定である。また、メディエーターの構成因子の１つがクロマチンの３次元構造に影響を及ぼす可能性が示唆できる結果を得ている。すでにこの変異株や変異組換えタンパク質を調整しているので、これらの解析も行う予定である。