2020 Fiscal Year Research-status Report
Elucidation of possible mechanisms of lymphatic metastasis noted by a novel lymphangiogenic factor
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19K07171
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| Research Institution | International University of Health and Welfare |
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Principal Investigator |
八木 秀樹 国際医療福祉大学, 薬学部, 教授 (40250740)
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2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | リンパ節転移 / 乳癌細胞 / リンパ管内皮細胞 / LYVE-1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年の癌治療法の進歩によって、遠隔転移が患者の予後を大きく左右する重要な因子となってきた。そこで、乳癌リンパ節転移モデルを用いて、その転移機構を明らかにし、新規転移抑制薬の開発を目指すことを本研究の目的とする。申請者が樹立した高リンパ節転移ヒト乳癌細胞株を移植することで、自然にリンパ節転移が生じる転移モデルを用いて、申請者は研究を行ってきた。このリンパ節高転移株MDA-MB-231-LN（MDA-LN）の同所性移植腫瘍内にリンパ管が多数存在することから、MDA-LN細胞はリンパ管新生因子を産生しているものと考えた。一方、このMDA-LN細胞から既知のリンパ管新生因子であるVEGF-C, -Dの産生を認めなかったことから、新たなリンパ管新生因子の産生が示唆された。本研究では新規リンパ管新生因子の探索を行う。その結果、転移メカニズムを解明、その治療標的分子の探索につなげる。
2019年度にリンパ管内皮細胞株SVEC4-10を用いて、wound healing assayを行うことにより、親株と比して高転移株であるMDA-LN細胞の培養上清を添加することで、細胞遊走性が上がること見出した。2020年度はさらに実験結果の精度を上げるとともに、培養上清の分画とその遊走活性との相関を見出そうと試みたが、思うように進捗しなかった。一方で、LYVE-1分子がこの遊走に関与する結果が得られた。我々はすでに抗LYVE-1抗体の作製に成功しており、この点も詳細に詰めていくことが今後の課題である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
コロナ禍で、オンライン授業の学生対応やマニュアル作りなどの対応やハイブリッド授業の対応などに追われて、思うように研究が進行しなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
2020年度までに、MDA-LN細胞の培養上清中にリンパ管内皮細胞の遊走活性を示す因子の存在が確認された。2021年度ではMDA-LN細胞の培養上清をイオン交換クロマトグラフィーにより分画し、リンパ管内皮細胞SVEC4-10を用いて、その遊走活性や管腔形成能などを指標に性状解析する。
これとともに、MDA-LN細胞の培養上清中に含有されるリンパ管新生因子等によるLYVE-1分子に対する作用についても、LYVE-1遺伝子導入細胞や抗LYVE-1モノクローナル抗体を用いて、詳細に検討する。
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| Causes of Carryover |
コロナ禍で、研究計画が大きく遅延したため、次年度への繰越金を生じた。
次年度はMDA-LN細胞の培養上清を分画するためのイオン交換クロマトグラフィーやゲルろ過用のカラムを購入する予定である。また、細胞遊走活性を測定するために、Transwellを購入する予定である。
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