2020 Fiscal Year Research-status Report
Analyses of Tumor-Associated Macrophage in Lung Cancer with Next Generation Sequence and Tissue Clearing
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19K07454
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| Research Institution | Akita University |
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Principal Investigator |
後藤 明輝 秋田大学, 医学系研究科, 教授 (90317090)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 正光 秋田大学, 医学系研究科, 教授 (20291396)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 非小細胞肺癌 / 腫瘍関連マクロファージ / TP53遺伝子異常 / 組織透明化技術 / リキッドバイオプシー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は“非小細胞肺癌での腫瘍関連マクロファージ（TAM：Tumor-Associated Macrophage）の多寡を決める癌の遺伝子異常は何か”を次世代シーケンス解析により明らかにし、“腫瘍関連マクロファージの3次元的（立体）分布状態やその意義”を組織透明化技術により明らかにすることにある。研究2年目である本年度は以下の実績を得た。
1. 前年度、非小細胞肺癌手術症例凍結保存癌組織のターゲットシーケンス(TruSight Tumor 15)により、TP53遺伝子異常、PIK3CA遺伝子異常を有する非小細胞肺癌で腫瘍関連マクロファージが多い可能性が示された。この結果の検証のため、本年度は非小細胞肺癌手術症例ホルマリン固定パラフィン包埋癌組織のサンガーシーケンスを施行した。その結果、P53遺伝子異常を有する非小細胞肺癌で腫瘍関連マクロファージが多いことが実証された。PIK3CA遺伝子異常については、PIK3CA遺伝子異常を有する症例の頻度が少ないため、実証には至らなかった。
2. 前年度の研究により、組織透明化技術を用いてヒト肺組織でCD68, CD204陽性マクロファージを300-500マイクロメートル厚にわたり3次元的に評価可能であることが検証されたため、非小細胞肺癌組織を用いて同様の染色を行い、CD68, CD204陽性マクロファージの立体分布の観察を開始した。
3. １の結果に基づき、非小細胞肺癌症例でリキッドバイオプシーによる腫瘍関連マクロファージの評価を本研究では目指している。そのサンプルとして非小細胞癌手術病理検体からの肺動静脈貯留血の採取を開始した。
以上の実績をもとに来年度の研究を当初計画どおりすすめ、研究目的を達成する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究の目的は“非小細胞肺癌でのTAM（Tumor-Associated Macrophage）の多寡を決める癌の遺伝子異常は何か”を次世代シーケンス解析により明らかにし、“TAMの3次元的（立体）分布状態やその意義”を組織透明化技術により明らかにすることにある。研究２年目である本年度は、初年度の成果に基づき以下の成果を得た。
1. 非小細胞肺癌手術症例ホルマリン固定パラフィン包埋癌組織のサンガーシーケンスを施行した。その結果、P53遺伝子異常を有する非小細胞肺癌で腫瘍関連マクロファージが多いことが実証された。PIK3CA遺伝子異常については、PIK3CA遺伝子異常を有する症例の頻度が少ないため、実証には至らなかった。
2.組織透明化技術を用いてヒト肺組織でCD68, CD204陽性マクロファージを300-500マイクロメートル厚にわたり3次元的に評価可能であることが検証されたため、非小細胞肺癌組織を用いて同様の染色を行い、CD68, CD204陽性マクロファージの立体分布の観察を開始した。
3. 本研究では、1の結果に基づき、非小細胞肺癌症例でリキッドバイオプシーによる腫瘍関連マクロファージの評価を本研究では目指している。そのサンプルとして非小細胞癌手術病理検体からの肺動静脈貯留血の採取を開始した。
以上の進捗状況より、本研究はおおむね順調に進展していると判断される。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究の目的は“非小細胞肺癌でのTAM（Tumor-Associated Macrophage）の多寡を決める癌の遺伝子異常は何か”を次世代シーケンス解析により明らかにし、“TAMの3次元的（立体）分布状態やその意義”を組織透明化技術により明らかにすることにある。その目的の達成に向け、過年度および本年度の成果にもとづき、最終年度となる次年度は１.TAMを計測済みの秋田大学医学部付属病院の非小細肺癌手術症例297例につき、TP53遺伝子異常とTAM数の相関を中心とし、臨床病理学的事項との関わりを複合的に解析し、その結果を英語論文として公表する。２．非小細胞肺癌組織をにおけるCD68, CD204陽性マクロファージの立体分布の観察結果を、地理、空間情報の分野で多用される空間分析の手法を用いて定量的に解析する。
３．非小細胞肺癌症例でリキッドバイオプシーによる腫瘍関連マクロファージの評価が可能かを検証するため、て非小細胞癌手術病理検体からの肺動静脈貯留血でTP53遺伝子異常の検索を行い、同一症例の病理組織標本で腫瘍関連マクロファージの評価を行う。
いずれも、当初の研究計画にもとづいた今後の研究の推進方策である。
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