2019 Fiscal Year Research-status Report
p53 pathway and its potential targeted therapeutic approach
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19K07645
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Research Institution | Sapporo Medical University |
Principal Investigator |
時野 隆至 札幌医科大学, 医学部, 教授 (40202197)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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Keywords | TP53 / がん抑制遺伝子 |
Outline of Annual Research Achievements |
p53はヒト悪性腫瘍で最も高頻度に変異しているが,「がん抑制遺伝子」であるためp53経路をターゲットとした抗がん剤の開発は遅れている.そのためp53による転写ネットワークの全貌を解明することは,そのゲノム情報にもとづいたがん治療に有望な分子標的治療薬の開発につながる可能性がある. p53はタンパクコード遺伝子のみならずmicroRNAおよび長鎖非コードRNA (lncRNA) の発現制御を介して腫瘍抑制機能を発揮している.本年度は,p53の直接の転写標的となる長鎖非コードRNA (lncRNA)を同定するために,クロマチン免疫沈降産物の次世代シーケンサ解析 (ChIP-seq) およびバイオインフォマティクスを利用したインシリコp53結合モチーフ検索を併用した.その結果,肺がん細胞株H1299で14種類のlncRNAがp53強制発現により発現誘導された. p53ノックアウト大腸がん細胞株HCT116p53(-/-)を利用した実験により,このうち7つのlncRNAについてp53遺伝子依存的に発現が上昇した.さらに,これらのlncRNAのうち3つについて,p53遺伝子変異が認められる肝がん細胞株Hep3Bおよび大腸がん細胞株DLD1においてsiRNAによるノックダウン実験を行い,p53のアポトーシス誘導能に対する影響を調べた.その結果,2つのlincRNAはsiRNAノックダウンによりp53誘導性アポトーシスを減少させるが,一方,もう1つのlncRNAはsiRNAノックダウンによりアポトーシスの増強が認められた.
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
p53の直接の転写標的となる長鎖非コードRNA (lncRNA)のゲノム網羅的な検索はp53による転写ネットワークの全貌を解明するために重要な課題である.本年度は,p53の直接の転写標的となる長鎖非コードRNA (lncRNA: long non-coding RNA)を同定するために,クロマチン免疫沈降産物の次世代シーケンサ解析 (ChIP-seq) およびバイオインフォマティクスを利用したインシリコp53結合モチーフ検索を併用した.その結果,肺がん細胞株H1299においてp53強制発現により発現誘導された14種類のlncRNAを同定できた.この進捗状況から,おおむね順調に進展していると自己評価した.
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Strategy for Future Research Activity |
今後の研究の推進方策として,p53により転写制御される癌浸潤・転移に関与する標的長鎖非コードRNA (lncRNA)を探索および同定し,そのp53転写標的lncRNA遺伝子の機能を解明する.癌浸潤・転移に関与するlncRNA遺伝子の同定は,癌の予後予測および分子標的治療薬の開発に発展できる可能性がある.
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Causes of Carryover |
近年,複数の腫瘍細胞株においてp53発現誘導後のRNA-seqおよびChIP-seq解析結果のデータが公開され,利用可能となった.そのため,次世代シーケンサーを利用したRNA-seqおよびChIP-seq解析実験に関わる高価な試薬の節約ができた. 次年度の使用計画として,p53の直接の転写標的となるlncRNAの機能解析のために,本年度の未使用額をその経費に充てることとしたい.
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[Journal Article] FGFR Signaling as a Candidate Therapeutic Target for Cancers Resistant to Carbon Ion Radiotherapy2019
Author(s)
Darwis NDM, Nachankar A, Sasaki Y, Matsui T, Noda SE, Murata K, Tamaki T, Ando K, Okonogi N, Shiba S, Irie D, Kaminuma T, Kumazawa T, Anakura M, Yamashita S, Hirakawa T, Kakoti S, Hirota Y, Tokino T, Iwase A, Ohno T, Shibata A, Oike T, Nakano T
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Journal Title
International Journal of Molecular Sciences
Volume: 20
Pages: 4563~4563
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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