2022 Fiscal Year Research-status Report

卵巣癌エクソソーム内在miR574-3Pを用いた腹膜播種の抑制

Research Project

Project/Area Number	19K07748
Research Institution	Hirosaki University
Principal Investigator	堀江香代弘前大学, 保健学研究科, 准教授 (30626825)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	渡邉純弘前大学, 保健学研究科, 教授 (10201188) 下田浩弘前大学, 医学研究科, 教授 (20274748)
Project Period (FY)	2019-04-01 – 2024-03-31
Keywords	エクソソーム / miRNA / 卵巣明細胞癌 / 腫瘍マーカー
Outline of Annual Research Achievements	2022年度の成果として、腹水エクソソームに内在する候補因子miR-574-3Pを引き続き続き行ったが、miR-574-3Pの発現量が微量なため再現性に乏しく、有意な結果が得られなかった。さらに高感度DropletDigital PCR (ddPCR)を用いた条件検討でもmiR-574-3Pは十分に検出されず、条件決定に至らなかった。さらに、臨床材料は個人差や採取した時の状態などサンプルの条件がバラバラであることから微量なmiR-574-3Pの検出は困難であることを確認した。以上の結果から、新たな候補因子を解析する方向に方針を変更した。具体的には、培養細上清から検出したエクソソーム内在miRNAのマイクロアレイ解析結果を再度詳細に見直し、卵巣明細胞癌　Clear cell carcinoma of the ovary (CCCO)細胞株２種で高発現を示し、他の組織型では発現を示さなかったmiRNAを卵巣明細胞癌のマーカーとして絞りこんだ。特に卵巣明細胞癌で特異的に発現の増加を示したmiRNAは近年日本で増加している卵巣明細胞癌悪性モニタリングマーカーとしての有用性が示唆されるなど臨床への寄与が大きいことが考えられ、以上の成果を論文として投稿し2022年6月国際誌に掲載された。Kayo Horie, et al., Molecules, 27(12):3953,2022。加えて、臨床材料として腹水だけでなく血漿も倫理委員会の承認を得て解析が可能となった。今回新たに検出した卵巣明細胞癌で高発現を示すmiRNAは卵巣明細胞癌の腫瘍マーカや疾患の予後や悪性度をモニタリングするマーカーとしての可能性が期待される。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 前年度の「卵巣癌患者腹水を用いたmiR574-3Pバイオマーカー及び予後・予知因子の解析」および「卵巣癌細胞株と腹膜を構成する中皮細胞株を対象としてmiR574-3P抑制エクソソームの影響を明らかにする」は遅れている。その理由として、miR-574-3Pの発現量は微量で再現性に乏しく、有意な結果が得られなかった。さらに高感度DropletDigital PCR (ddPCR)を用いた条件検討でもmiR-574-3Pは十分に検出されず、条件決定に至らなかった。加えて臨床材料は個人差や採取した時の状態などサンプルの条件がバラバラであることから微量なmiR-574-3Pの検出は困難であった。そのため卵巣明細胞癌で高発現を示すmiRNAを新たな候補因子として解析する方向に方針を変更した。さらに、コロナ感染拡大防止のため2021年～2022年は病棟への入室が制限されサンプル採取が不可となり、検討に用いる十分なサンプルの確保が困難であったため。
Strategy for Future Research Activity	腹水や血液サンプルからのmiRNA解析を行うにあたり、miRNA回収キットの検討をやり直すなど高効率で回収する方法を検出する。さらに卵巣明細胞癌のマーカーとして絞りこんだ候補miRNAについて、患者腹水や血漿サンプルを用いてRealtime PCRやDropletDigital　PCR(ddPCR)を用いたmiRNA発現の定量化を行う。また、臨床病期や組織型、抗がん剤や化学療法の有無などの臨床情報を加味した検討を行う。以上の結果から候補miRNAが卵巣癌のバイオマーカーおよび予後・予知因子となる可能性を検討する。
Causes of Carryover	【理由】腹水からのエクソソーム回収や内在miRNA解析の条件検討に時間がかかり、計画予定の「卵巣癌細胞株と腹膜を構成する中皮細胞株を対象としてmiR574-3P抑制エクソソームの影響を明らかにする」に着手できず、これらの実験行うための試薬や細胞を購入しなかったため【使用計画】本年度の差額は今回新たに卵巣明細胞癌のマーカーとして絞りこんだ候補因子についてリアルタイムPCRやddPCRの解析に用いる。また腹水や血液サンプルからのmiRNA解析を行うにあたり高効率で回収するキットを検討する