2019 Fiscal Year Research-status Report
サイトカイン遺伝子の一塩基多型解析とEVを用いた難治性ITPの早期診断法の開発
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19K07948
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
野村 昌作 関西医科大学, 医学部, 教授 (20218358)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊藤 量基 関西医科大学, 医学部, 准教授 (70434826)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ITP / EV / サイトカイン遺伝子 / 樹状細胞 / SNP |
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| Outline of Annual Research Achievements |
免疫性血小板減少症(ITP)では、ステロイドを中心とした治療薬の適正な使用が、その後の臨床経過を左右しているが、難治性のITPに関する対策は未だ完全ではない。本研究では、これら難治性のITPを早期に診断して適切な治療ストラテジーを構築するために、Extracellular vesicle (EV)とサイトカイン遺伝子の一塩基多型(SNP)解析を組み合わせた早期診断システムの開発を行うことを目的としている。本年度の研究では、まずExosome・Ectosome・Apoptic Bodyの3種類のEVの構造解析を行った。大部分のEVは、フォスファチジルセリン(PS)を含むが、リンパ球機能分子抗原の発現はごく軽度であった。EVにおけるインテグリンの発現は低値群・高値群の2群に分類され、PSの発現との間に乖離が認められた。EVによる標的細胞のICAM-1発現のメカニズムには、PKCとMAPKの関与が証明された。次に、ITP症例からのDNA抽出を行い、シーケンスに特有のプローブを含むOneLamda社のキットによるPCR-SSP方法を使用して、サイトカイン遺伝子多型を決定した。なおサイトカイン関連遺伝子としては、1.TNFα(-308)*G/A 2.IL-6(-174)*G/C 3.IL-10 (-1082)*G/A、(-819)*C/T、(-592)*C/A 4.IFNγ(+874)*T/A 5.TGFβ(コドン10,25) の5つを対象とした。測定の結果、ITPでは、IL-10遺伝子ハプロタイプの頻度としてATA/ATAが54.4%を占めており、nonATA/ATAに比較して血小板数が有意に低下していることが判明した。以上の結果より、ITPの病態にはサイトカイン遺伝子多型が関与している事が明確となり、今後の本研究の遂行に伴う治療の反応性とEVに関するデータを組み込むことによって、難治性ITPの早期診断および適切な治療ストラテジーの構築に結びつく可能性が高いことが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ITPでは、抗血小板抗体の生成および抗体の結合した血小板の破壊のメカニズムにおいて単球・マクロファージの活性化が重要な役割を果たしている。したがって、本研究においても単球・マクロファージ系の培養細胞であるTHP-1を用いた研究がメインテーマの一つになっている。活性化したTHP-1からのEVの構造解析は順調に進んでいるが、EVが巨核球や血管内皮細胞に対してどのようなメカニズムでシグナルを伝達しているかの検討がやや遅れている。おそらく、反応させる温度と培養液中のカルシウム濃度が重要なポイントではないかと考えて、今その基礎実験を追加しているところである。一方、ITP症例のサイトカイン遺伝子多型の検討は当初の計画よりもはるかに順調に進行しており、令和2年度の前半には目標症例を達成できると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
進捗状況で述べたように、ITP症例のサイトカイン遺伝子多型の検討は順調に進んでいる。令和2年度には、なるべく早い時期にEVの構造解析およびITPにおける標的細胞の検討を終えて、EVの樹状細胞(DC)免疫誘導ならびにサイトカイン産生の研究につなげたいと考えている。そのために、計画を前倒しにして、EVの構造解析およびITPにおける標的細胞の検討と並行して、EVの樹状細胞(DC)免疫誘導ならびにサイトカイン産生の研究を予定よりも早くスタートさせたいと考えている。すなわち、純化した2種類のヒトDC亜群と3種類のEVを組み合わせて、それぞれを培養し、各DC亜群の成熟活性化度合いに関してCD40,CD40L, CD80, CD86, CD83の発現をフローサイトメーターで解析したいと考えている。また、ITP患者の治療経過に基づく患者の層別解析も並行して実施したいと考えている。
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[Journal Article] Evaluation of azacitidine in patients with transplant-ineligible myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia with myelodysplasia-related changes in a Japanese clinical setting2019
Author(s)
Nakaya Aya, Fujita Shinya, Satake Atsushi, Nakanishi Takahisa, Azuma Yoshiko, Tsubokura Yukie, Saito Ryo, Konishi Akiko, Hotta Masaaki, Yoshimura Hideaki, Ishii Kazuyoshi, Ito Tomoki, Nomura Shosaku
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Journal Title
Oncology Letters
Volume: 19
Pages: 1317-1321
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Trend of salvage treatment in diffuse large B cell lymphoma in the outpatient chemotherapy era2019
Author(s)
Nakaya Aya, Fujita Sshinya, Satake Atsushi, Nakanishi Takahisa, Azuma Yoshiko, Tsubokura Yukie, Saito Ryo, Konishi Akiko, Hotta Masaaki, Yoshimura Hideaki, Ishii Kazuyoshi, Ito Tomoki, Nomura Shosaku
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Journal Title
Molecular and Clinical Oncology
Volume: 19
Pages: 557-562
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] The immunomodulatory-drug, lenalidomide, sustains and enhances interferon-α production by human plasmacytoid dendritic cells2019
Author(s)
Kibata Kayo, Ito Tomoki, Inaba Muneo, Tanaka Akihiro, Iwata Ryoichi, Inagaki-Katashiba Noriko, Phan Vien, Satake Atsushi, Nomura Shosaku
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Journal Title
Jounal of Blood Medicine
Volume: 10
Pages: 217-226
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Evaluation of eltrombopag in patients with aplastic anemia in real-world experience2019
Author(s)
Konishi Akiko, Nakaya Aya, Fujita Shinya, Satake Atsushi, Nakanishi Takahisa, Azuma Yoshiko, Tsubokura Yukie, Saito Ryo, Hotta Masaaki, Yoshimura Hideaki, Ishii Kazuyoshi, Ito Tomoki, Nomura Shosaku
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Journal Title
Leukemia Research Reports
Volume: 11
Pages: 11-13
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Myodesopsia is a symptom of central nervous sysyem blast crisis in chronic myeloid leukemia2019
Author(s)
Ishii Kazuyoshi, Nakaya Aya, Fujita Shinya, Satake Atsushi, Azuma Yoshiko, Tsubokura Yukie, Saito Ryo, Konishi Akiko, Hotta Masaaki, Yoshimura Hideaki, Ito Tomoki, Nomura Shosaku
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Journal Title
Leukemia Research Reports
Volume: 11
Pages: 8-10
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Efficacy of CMV prophylaxis with letermovir early after transplantation2019
Author(s)
Satake Atsushi, Saito Ryo, Konishi Akiko, Yoshimura Hideaki, Hotta Masaaki, Nakanishi Takahisa, Fujita Shinya, Nakaya Aya, Ito Tomoki, Ishii Kazuyoshi, Nomura Shosaku
Organizer
45th ASH Annual Meeting of the EBMT
Int'l Joint Research
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