2021 Fiscal Year Research-status Report
膜障害に焦点を当てた高分子Aβオリゴマーの毒性機序に関する検討
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19K07965
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
小野 賢二郎 金沢大学, 医学系, 教授 (70377381)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
辻 まゆみ 昭和大学, 医学部, 教授 (40155544)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | アルツハイマー病 / オリゴマー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
目的：アミロイドβ蛋白(amyloid β-protein: Aβ)の凝集は、アルツハイマー病の病態に深く関わっているが、凝集最終段階である成熟線維より中間凝集体であるオリゴマーやプロトフィブリルの毒性に注目が集まっている（オリゴマー仮説）。しかし、その機序に関してはまだ不明瞭な点が多い。
昨年度までの研究によりAβ1-42 プロトフィブリルが膜損傷により神経毒性を発揮することを明らかにした。2021年度はフェノール化合物によるAβ1-42 プロトフィブリルの細胞毒性軽減効果およびその機序を明らかにする。
方法と結果：①Aβサンプルの準備：サイズ排除クロマトグラフィーを用いてAβ1-42溶液をインジェクトし、主にモノマーである低分子画分と高分子オリゴマーであるプロトフィブリル（protofibrils：PF）画分を抽出した。
②フェノール化合物によるAβ1-42 PF毒性軽減効果の検討：SH-SY5Y細胞を用いた3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide（MTT）法にてcell viabilityを測定し、フェノール化合物の一種であるミリセチンがAβ1-42 PFの細胞毒性を軽減させることを明らかにした。
③フェノール化合物によるAβ1-42 PF毒性の軽減機序の検討：酸化ストレスマーカーであるreactive oxygen species（ROS）、膜脂質過酸（diphenyl-1-pyrenylphosphine:DPPP）化を測定した結果、ミリセチンがROS、DPPPマーカーを減少させることを発見し、位相差顕微鏡および蛍光顕微鏡でも確認した。さらにMembrane Fluidity Kitにて蛍光標識後の細胞膜の膜流動性を検討し、ミリセチンがPFの膜流動性低下を抑制させることを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
アミロイドβ蛋白凝集（サイズクロマトグラフィーによる凝集体抽出、凝集活性、細胞毒性）の実験系はすでに確立している。2021年度は秋に研究代表者の異動があったが、共同研究者である辻まゆみ博士（昭和大学）との連携が順調に進んだために、計画以上に進展することができた。来年度はさらに研究を進める予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
フェノール化合物のAβ1-42 PF毒性に対する細胞保護効果の詳細な機序に関してさらに辻博士（昭和大学）と協力して細胞実験を進める予定である。
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| Causes of Carryover |
研究計画の立案段階、科学研究費申請段階ですでに研究に着手しており、本年度も共同研究者との連携が順調であったために費用を節約して実行することができた。さらに秋に研究代表者の異動があったため次年度使用額の研究費が生じた。来年度の研究費に当てる予定である。
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[Presentation] Cingulate island sign in SPECT: clinical biomarker correlations in LBD and AD2021
Author(s)
Futamura A, Hieda S, Mori Y, Sugimoto A, Kasai H, Kuroda T, Yano S, Kasuga K, Murakami H, Ikeuchi T, Ono K
Organizer
第62回日本神経学会学術大会
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[Presentation] Toxic Aβ42 conformer may accelerate the AD onset in the preclinical stage2021
Author(s)
Futamura A, Hieda S, Mori Y, Kasuga K, Sugimoto A, Kasai H, Kuroda T, Yano S, Tsuji M, Ikeuchi T, Irie K, Ono K
Organizer
第40回日本認知症学会学術集会
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