2019 Fiscal Year Research-status Report
鉄過剰状態における造血幹細胞内鉄代謝制御の解明-アナモルシンを中心に-
Project/Area Number |
19K08861
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Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
柴山 浩彦 大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (60346202)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野崎 健司 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (00836413)
横田 貴史 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (60403200)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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Keywords | アナモルシン / 鉄・硫黄クラスター / アポトーシス / 遺伝子欠損マウス / 条件付き遺伝子欠損マウス / 造血幹細胞 |
Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、申請者らがクローニングした鉄・硫黄クラスター形成に重要な役割を有する抗アポトーシス分子アナモルシン(AM)の造血幹細胞における機能と鉄過剰状態がAMの機能におよぼす影響についての解析をおこなっている。申請者らは、AMコンディショナルノックアウトマウス(AM flox/floxマウス)を作製することで、in vivoにおいて、種々の臓器、細胞のAMを欠損させることを可能としている。本研究では、MX-Creリコンビナーゼトランスジェニック(MX-Cre-Tg)マウスとAM flox/floxマウスを交配した MX-Cre-Tg/AM flox/floxマウスの造血幹細胞に焦点をあてた研究をおこなった。MX-Cre-Tg/AM flox/floxマウスにPIPCを投与することで、造血幹細胞のAMを欠損させることができる。実際、PIPCを投与したところ、一週間程度で、一部のマウスは死亡したが、投与後も生存するマウスが存在した。これらの生存したマウスの血球数を経時的に測定したところ、PIPC投与後に一過性に白血球、赤血球の減少を認めるものの、その後、血球数の回復が確認された。また、同時に、AM遺伝子のノックダウンが生じている割合を確認するため、LOX-P配列の前後に設定したプライマー配列を用いたReal time PCRでAM遺伝子の欠損割合を定量したところ、約10%程度は、AM遺伝子をノックダウンできずに残存していることが判明した。PIPC投与後も生存したマウスにおいては、これらの造血幹細胞が、再度、増殖し血球回復したものと考えられた。また、PIPCの投与法を種々検討しても、同様の結果であった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
準備実験では、MX-Cre-Tg/AM flox/floxマウスにPIPCを投与したところ、ほとんどのマウスが死亡したため、MX-Cre-Tg/AM flox/floxマウスから分離した造血幹細胞を正常マウスに移植し、キメラ状態のマウスを作成し、さらに、それらのマウスを鉄過剰状態にしたあとで、PIPCを投与する必要があると考えていたが、MX-Cre-Tg/AM flox/floxマウスにPIPCを投与しても、多くのマウスは、一過性に血球減少をきたすのみで、死亡まで至らないため、移植実験をおこなわずとも、AM欠損造血幹細胞を得ることが可能であることが判明した。しかし、PIPC投与後に、AM欠損した造血幹細胞は、おそらくアポトーシスをおこし、その細胞数は減少すると思われるため、PIPC投与後に造血幹細胞を純化するタイミングについて、詳細に検討する必要がある。最も、AM遺伝子を欠損させた造血幹細胞が多くなるタイミングで、細胞内の遺伝子発現やシグナル伝達の変化を検討する必要がある。
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Strategy for Future Research Activity |
今後は、MX-Cre-Tg/AM flox/floxマウスにPIPCを投与し、その造血幹細胞において、最もAM遺伝子が欠損できるタイミングを、経時的に検体を採取することで、明らかにする必要がある。そのタイミングにおいて、純化した造血幹細胞からmRNAを抽出し、mRNA Seqをおこなうことで、AMを欠損させた造血幹細胞での遺伝子発現の変化を網羅的に解析する。変化がみられた遺伝子の中で、細胞の生存・増殖・アポトーシスに関わる遺伝子に着目する。現在までに、他の細胞(Bリンパ球)において、AM遺伝子を欠損させた際に、P38 MAPK遺伝子の発現低下がみられたというデータを得ており、造血幹細胞においても、P38 MAPK遺伝子の発現に変化がみられるかどうかに着目している。その後は、さらに、鉄過剰状態としたMX-Cre-Tg/AM flox/floxマウスにPIPCを投与し、血球数の動態に影響が認められるかどうか、さらに、その際に、AMを欠損させた造血幹細胞での遺伝子発現の変化をmRNA Seqをおこなうことで、同様に解析する予定である。
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Research Products
(24 results)
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[Journal Article] Treatment-free remission after first-line dasatinib discontinuation in patients with chronic myeloid leukaemia (first-line DADI trial): a single-arm, multicentre, phase 2 trial.2020
Author(s)
Kimura S, Imagawa J, Murai K, Hino M, Kitawaki T, Okada M, Tanaka H, Shindo M, Kumagai T, Ikezoe T, Uoshima N, Sato T, Watanabe R, Kowata S, Hayakawa M, Hosoki T, Ikeda K, Kobayashi T, Kakinoki Y, Nishimoto T, Takezako N, Shibayama H, Takaori-Kondo A, Nakamae H, Kawaguchi A, Ureshino H, Sakamoto J, Ishida Y
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Journal Title
Lancet Haematol
Volume: 7
Pages: e218-e225
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Additional validation of Osaka method (0.01mol/L dithiothreitol) for negating the daratumumab interference.2019
Author(s)
Hosokawa M, Kashiwagi H, Nakayama K, Sakuragi M, Nakao M, Morikawa T, Kiyokawa T, Aochi H, Nagamine K, Shibayama H, Tomiyama Y.
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Journal Title
Transfusion
Volume: 59
Pages: 2479-2480
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Carfilzomib monotherapy in Japanese patients with relapsed or refractory multiple myeloma: A phase 1/2 study.2019
Author(s)
Iida S, Watanabe T, Matsumoto M, Suzuki K, Sunami K, Ishida T, Ando K, Chou T, Ozaki S, Taniwaki M, Uike N, Shibayama H, Hatake K, Izutsu K, Ishikawa T, Shumiya Y, Tobinai K.
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Journal Title
Cancer Sci
Volume: 110
Pages: 2924-2932
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Unexpected complication of R-CHOP chemotherapy: Rapidly progressive bronchiolitis obliterans syndrome.2019
Author(s)
Nozaki K, Ezoe S, Hamaguchi M, Tsutsumi K, Kusakabe S, Morikawa Y, Fujita J, Fukushima K, Maeda T, Shibayama H, Kumanogo A, Kanakura Y.
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Journal Title
Eur J Case Rep Intern Med
Volume: 6
Pages: 001266
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Endothelial Cell-Selective Adhesion Molecule Contributes to the Development of Definitive Hematopoiesis in the Fetal Liver.2019
Author(s)
Ueda T, Yokota T, Okuzaki D, Uno Y, Mashimo T, Kubota Y, Sudo T, Ishibashi T, Shingai Y, Doi Y, Ozawa T, Nakai R, Tanimura A, Ichii M, Ezoe S, Shibayama H, Oritani K, Kanakura Y.
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Journal Title
Stem Cell Reports
Volume: 13
Pages: 992-1005
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] ENTEROCOCCUS-PREDOMINANT INTESTINAL MICROBIOTA INDICATES POOR PROGNOSIS AFTER HEMATOPOIETIC STEM CELL TRANSPLANTATION.2019
Author(s)
Shinsuke Kusakabe, Kentaro Fukushima, Takafumi Yokota, Ritsuko Nakai, Akihisa Hino, Yasuhiro Nagate, Yukiko Doi, Jiro Fujita, Daisuke Motooka, Shota Nakamura, Hirohiko Shibayama, Yuzuru Kanakura
Organizer
The 24th European Hematology Association
Int'l Joint Research
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[Presentation] The influence of tumor immune microenvironment and tumor immunity on the pathogenesis, treatment and prognosis of post-transplant lymphoproliferative disorders (PTLD).2019
Author(s)
Hideaki Saito, Hirohiko Shibayama, Hiroaki Miyoshi, Jun Toda, Shinsuke Kusakabe, Michiko Ichii, Jiro Fujita, Kentaro Fukushima, Takafumi Yokota, Tetsuo Maeda, Maso Mizuki, Kenji Oritani, Masao Seto, Koichi Ohshima, Yuzuru Kanakura
Organizer
15th International Conference on Malignant Lymphoma
Int'l Joint Research
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[Presentation] Elevated serum soluble interleukin-2 receptor level is a useful prognostic factor for disease-specific overall survival in patients with newly diagnosed follicular lymphoma before initiation of treatment.2019
Author(s)
Nozaki K, Sugahara H, Ueda S, Ishikawa J, Fuji S, Masaie H, Tada Y, Suga M, Tsutsumi K, Shibata K, Kida S, Karasuno, T Sata H, Yasumi,5 Masato Iida M, Mitsui H,Kamae T, Saito, N Murakami H, Moriyama Y, Kawakami M,Kato R, Nakae Y,Kida T, Kosugi S, Nakagawa, M Uchida Y, Azenishi Y, Sakaniwa R, Kitamura T, Shibayama H
Organizer
The American Society of Hematology 61th Annual Meeting
Int'l Joint Research
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[Presentation] Phase 2 Study of Tirabrutinib (ONO/GS-4059), a Second-Generation Bruton’s Tyrosine Kinase Inhibitor, Monotherapy in Patients with Treatment-Naive or Relapsed/Refractory Waldenstrom Macroglobulinemia.2019
Author(s)
Wataru Munakata, Naohiro Sekiguchi, Rai Shinya, Kenshi Suzuki, Hiroshi Handa, Hirohiko Shibayama, Tomoyuki Endo, Yasuhito Terui, Noriko Iwaki, Noriko Fukuhara, Hiro Tatetsu, Shinsuke Iida, Takayuki Ishikawa, Ryota Shiibashi, Koji Izutsu
Organizer
The American Society of Hematology 61th Annual Meeting
Int'l Joint Research
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[Presentation] A young male immunocompetent patient of atypical CD56- EBER1- extraosseous plasmacytoma with plasmablastic morphology.2019
Author(s)
Nakai R, Ueda Y, Wada N, Hino A, Kusakabe S, Nagate Y, Doi Y, Fujita J, Fukushima K, Yokota T, Shibayama H, Morii E, Kanakura Y.
Organizer
第59回 リンパ網内系学会
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[Presentation] Contributions of high number of PD-1+ tumor infiltrating lymphocytes to early onset of PTLD.2019
Author(s)
Hideaki Saito, Hiroaki Miyoshi, Hirohiko Shibayama, Jun Toda, Shinsuke Kusakabe, Michiko Ichii, Jiro Fujita, Kentaro Fukushima, Tetsuo Maeda, Masao Mizuki, Kenji Oritani, Masao Seto, Takafumi Yokota, Yuzuru Kanakura, and Koichi Ohshima
Organizer
第81回日本血液学会学術集会
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[Presentation] 抗CD38 抗体isatuximab単剤による日本人の再発難治多発性骨髄腫患者を対象とした第1/2相試験2019
Author(s)
李 政樹, 角南一貴, 松本守生, 島崎千尋, 麻奥英毅, 丸山 大, 柴山浩彦, 石澤 賢一, 高松博幸, 池田宇次, 金子仁臣, 内山倫宏, 木口 亨, 井山 諭, 村上博和, 佐々木 亨, 多田圭佑, 鈴木憲史, 飯田真介
Organizer
第81回日本血液学会学術集会
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[Presentation] 実臨床におけるイキサゾミブの治療成績:関西ミエローマフォーラムのデータベースによる多施設後方視的解析2019
Author(s)
高桑輝人, 山村亮介, 太田健介, 金子仁臣, 今田和典, 中谷 綾, 淵田真一, 柴山浩彦, 松田光弘, 島津 裕, 足立陽子, 小杉 智, 内山人二, 田中宏和, 花本 仁, 志村勇司, 諫田淳也, 恩田佳幸, 魚嶋伸彦, 八木秀男, 吉原 哲, 日野雅之, 島崎千尋, 高折晃史, 黒田純也, 松村 到, 金倉 譲, 野村昌作
Organizer
第81回日本血液学会学術集会
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[Presentation] 多発性骨髄腫におけるクリニカルシークエンスの実行可能性の研究2019
Author(s)
李 政樹, 安田貴彦, 半田 寛, 石田禎夫, 柴山浩彦, 安倍正博, 金森貴之, 真田 昌, 服部浩佳, 西島 大, 倉橋浩樹, 白石友一, 山本松雄, 齋藤明子, 宮野 悟, 小川誠司, 堀部敬三, 飯田真介
Organizer
第81回日本血液学会学術集会
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