2021 Fiscal Year Annual Research Report
関節リウマチ患者由来抗シトルリン化ペプチド抗体を用いた破骨細胞分化抑制剤の開発
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19K08908
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
杉山 英二 広島大学, 病院(医), 名誉教授 (70179167)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小澤 龍彦 富山大学, 学術研究部医学系, 准教授 (10432105)
應原 一久 広島大学, 医系科学研究科(歯), 助教 (80550425)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 関節リウマチ / LPS / 滑膜細胞 / CXCL10 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度までの実験結果より、関節リウマチ患者から得られた抗シトルリン化蛋白抗体（CCP-Ab1）の対応抗原はシトルリン化フィブリノゲン(cit-Fb)であり、CCP-Ab1は関節炎モデルマウスへの投与により、強い病原性を認めたために、cit-Fbの病原性への関与を明らかにする目的で、関節リウマチ滑膜細胞培養系にcit-Fbを添加して炎症性サイトカインの産生に対する効果を遺伝子、蛋白レベルで検討した。cit-Fbはtoll-like receptor 4 (TLR4)のシグナルの活性化を介して, CXCL10の発現を強く誘導したが、LPSの中和活性を有するポリミキシンB（PMB）によりCXCL10誘導作用が部分的に抑制されること、熱処理したcit-Fb試薬においてもCXCL10誘導作用が認められることから、試薬中のLPSの混入が疑われ、最終的にリムルス試験 (LAL assay)でLPSを測定し、cit-Fb試薬(1μg/ml)から0.3 ng/ml相当のLPS活性を認めた。TLR4関連実験では、簡便なLPS検出法としてPMX中和作用や熱処理法が用いられているが、その効果は部分的であり、判断に難渋することが多い。LPSはリピッドA、コア多糖体、O抗原多糖で構成されるが、O抗原多糖が欠失したLPS変異体（R-LPS）が存在し、コア多糖の付加の程度によりRa, Rc, Re-LPSに分類され、これらの変異体のLPS活性はそれぞれ異なる。そこで、Re-LPSを用いて検討したところ、大腸菌由来のLPS(wild-type LPS)のサイトカイン誘導作用を濃度依存性に抑制するとともに、LPSの混入したcit-Fb試薬によるCXCL10誘導をほぼ完全に抑制したことから、Re-LPSのLPS拮抗作用は、LPSの混入を迅速に検出するための有用なツールになると考えられた。
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Research Products
(5 results)
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[Journal Article] The Lipopolysaccharide Mutant Re-LPS Is a Useful Tool for Detecting LPS Contamination in Rheumatoid Synovial Cell Cultures2022
Author(s)
Kohno, H. Ouhara, K. Mokuda, S. Tokunaga, T. Sugimoto, T. Watanabe, H. Ishitoku, M. Yoshida, Y. Mizuno, N. Ozawa, T. Kawataka, M. Hirata, S. Kishi, H. Sugiyama, E
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Journal Title
Pathobiology
Volume: 89
Pages: 92-100
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Nailfold capillaries and myositis specific antibodies in anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody-positive dermatomyositis2021
Author(s)
Sugimoto, T. Mokuda, S. Kohno, H. Ishitoku, M. Araki, K. Watanabe, H. Tokunaga, T. Yoshida, Y. Hirata, S. Sugiyama, E.
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Journal Title
Rheumatology (Oxford)
Volume: -
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Usefulness of nailfold video-capillaroscopy for diagnosing patients positive for anti-centromere antibody.2021
Author(s)
Tomohiro Sugimoto, Hiroki Kobayashi, Harumichi Suma, Yohei Hosokawa, Michinori Ishitoku, Hiroki Kohno, Hirofumi Watanabe, Tadahiro Tokunaga, Shinpei Ohnari, Yusuke Yoshida, Sho Mokuda, Shintaro Hirata, Eiji Sugiyama
Organizer
第６５回日本リウマチ学会総会・学術集会
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