トロンボモジュリン構成ドメインによる抗凝固能・抗炎症作用の解明

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K09251
• Research Institution: Teikyo University
• Principal Investigator: 池田 司 帝京大学, 医学部, 助手 (10768170)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 内山 雅照 帝京大学, 医学部, 助教 (60713295)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: トロンボモジュリン / 心臓移植

Outline of Annual Research Achievements

臓器移植における最大の課題である拒絶反応の内、急性拒絶反応の制御法の開発により移植成績は良好な傾向となった。一方で、慢性拒絶反応に関しては依然制御できない状態であり、移植臓器不全の大きな要因となっている。微小血管の内膜肥厚や微小血管炎が一因となる慢性拒絶反応に対して、血管内膜トロンボモジュリン（以下、TM）の減少が慢性拒絶反応の基盤となるのではと考えた。現在、血管内皮に元々存在するTMは炎症や物理的損傷によって部分的に剥離されると血液凝固を抑制する機能は果たさなくなると考えられている。構造が変化したTMは抗凝固作用を持たないことと、静脈投与したリコモジュリンがDIC急性期スコアや凝固系マーカーを改善させた等の報告から、外から補充されたTMが炎症や損傷を受けた血管内皮や血栓等に生着すること（固相化）で効果を発現している可能性が高い。また、高濃度で血液中に投与されることによる効果も否定できない。しかし、その生着部位やどのドメインが効果発現の中心となっているか不明のままである。TMの詳細な作用機序を解明するために、TMを構成する3つのドメイン（D1～D3）を用いて、TM生着部位の特定と各ドメインによる抗凝固能と抗炎症作用を評価する。
2020年度はTMの構成ドメインによる生着延長期間測定と移植心の病理評価を行った。まず、手術用顕微鏡を用いて、C57BL/6マウス心臓をCBAマウスの腹部に移植すると、無処置（無治療群）では約7日間で拒絶される。TMの構成ドメインはD1、D2、D3からなり、それぞれのドメインを移植マウスに腹腔内投与した。結果はD1が最も生着延長効果を示し、FACSを用いて制御性T細胞の誘導を確認した。さらに、D1投与群の移植心の病理染色では心筋構造が保たれ、面積染色では制御性T細胞の心筋内集積を確認した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

実験の中心となるドメイン投与群のマウスモデルの作成が順調であったため。

Strategy for Future Research Activity

TM構成ドメインの投与による血管保護効果の確認

Causes of Carryover

・マウス繁殖が予想より順調であり、追加購入するマウスが少なかった。
・ドメイン投与群のマウスモデルの作成が順調であったため。
・手術用薬剤（麻酔薬、縫合糸など）を節約し、当該年度の追加購入を控えることが出来たため。