声帯上皮における接着分子発現と胃酸逆流による影響の解析

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K09889
• Research Institution: Fujita Health University
• Principal Investigator: 楯谷 一郎 藤田医科大学, 医学部, 教授 (20526363)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 楯谷 智子 京都先端科学大学, 健康医療学部, 教授 (10512311) ; 樋渡 直 京都大学, 医学研究科, 客員研究員 (10808778) ; 岸本 曜 京都大学, 医学研究科, 助教 (80700517) ; 勝野 達也 京都大学, 医学研究科, 研究員 (90527665)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: クローディン / 胃食道逆流症 / 声帯上皮 / バリア

Outline of Annual Research Achievements

胃食道逆流症（Gastro Esophageal Reflux Disease：GERD）は胃酸が食道へ逆流することにより、胸やけなどの不快な自覚症状を感じる病態である。本邦でも生活環境の変化や食生活の欧米化などによりその発症が増えてきている。GERDは食道症候群と食道外症候群に分類されているが、耳鼻咽喉科疾患にも影響を及ぼすことが指摘されている。特に音声障害との関連が強く、声帯上皮の角化、潰瘍形成、肉芽形成、粘膜産生低下や、声帯溝症などを来し得ることが報告されており、音声障害患者の最大50%にGERDを認めることが報告されている。声帯は数百Hzの高周期で振動し音声を発生する組織であり、その表面は重層扁平上皮で覆われている。声帯上皮は喉頭内腔面に接しており、そのバリア構造により胃酸逆流を含む外的刺激から内部組織が守られていると考えられる。上皮組織のバリア構造においてタイト結合が重要な役割を担っており、特にクローディンはタイト結合の接着構造形成を担い、タイト結合の形成に関わる主要なタンパク質であることが知られている。クローディンには20以上のサブタイプが存在し、その組み合わせによって、タイト結合の特性が決定されている声帯上皮におけるタイト結合の存在は電子顕微鏡による研究により報告されているものの、構成タンパクの局在については我々がオクルディンの局在を報告している他には、クローディンを含め明らかにされていない。本研究の学術的「問い」は、正常声帯上皮におけるバリア機構の解明とGERDによる音声障害の発生機序の解明である。RT-PCRによって声帯組織で発現しているクローディンサブタイプを解析し、正常声帯組織でmRNAを発現しているクローディンを同定している。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ラットClaudinの23種類のサブタイプについて、それぞれのプライマーをデザインし、定量的PCRを行った結果、クローディン-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -10, -11, -12, -17, -22, -23のｍRNA発現が確認された。酸バリアとして働くクローディン-18は正常の声帯には発現を認めず、逆流性食道炎に対する声帯組織の易刺激性への関与を疑い、解析を進めている。

Strategy for Future Research Activity

これまでの研究により声帯組織でmRNAを発現していることが確認され、特にクローディン-18が発現していないことが、声帯上皮の酸による易刺激性に関与している可能性が疑われる。今後は、声帯傷害モデルを作成し、声帯傷害後1週間、2週間、4週間、８週間におけるクローディンサブタイプの発現変化を経時的に解析する予定である。

Causes of Carryover

コロナ禍により参加予定であった学会が中止され、また実験遂行に必要な試薬を節約できたため、次年度使用額が生じた。次年度は当該実験に必要な試薬の購入並びに学会参加費に充てる予定である。