2021 Fiscal Year Annual Research Report
The development of analytical method for sialylated glycans and glycoproteins by aminolysis-SALSA
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19K15597
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
花松 久寿 北海道大学, 医学研究院, 特任助教 (70734185)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 糖鎖解析 / グライコミクス / 質量分析 / シアル酸 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は申請者がこれまでに開発した α2,3 シアル酸開環アミノリシスを基盤としたシアル酸結合様式特異的修飾法 (アミノリシス-SALSA法) を応用し、シアリル化糖鎖および糖タンパク質解析法の開発を目的としている。これまでに、安定同位体試薬を用いた糖鎖比較質量解析法、ビオチン誘導体化アミン試薬を用いた糖タンパク質の精製・濃縮法の開発を行なってきた。本年度は、 O 結合型糖鎖へのシアル酸結合様式特異的修飾法の適用を検討した。O 結合型糖鎖は N 結合型糖鎖などとは異なり、効率的にタンパク質から O 結合型糖鎖を切断する酵素が存在しないため化学的切断法により調製し、グライコブロッティング法で捕捉した O 結合型糖鎖を固相上でアミノリシス-SALSA 法を行なった。しかしながら、上記の方法ではシアル酸結合様式特異的な修飾が進行しないことがわかった。そこで昨年度に開発した、エステル化により調製したシアリル化糖鎖と直鎖型一級アミン試薬を反応させ、ラクトン環開裂アミノリシスにより選択的に α2,3 シアル酸のみをアミドへと交換を行うエステル-アミド交換法（Lactone-Driven Ester-to-Amide Derivatization (LEAD)-SALSA 法）を適用したところ、シアル酸結合様式特異的な誘導化が可能であることを見出した。また、グライコブロッティング法を併用することで、糖鎖還元末端の高感度化ラベル化や多検体の解析も可能となった。現在、本研究成果を学術論文として報告するため準備を進めている。
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