2019 Fiscal Year Research-status Report
新規開発低分子化合物による生体内オートファジーの可視化
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19K16119
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
桜井 一 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, プロジェクト助教 (00796732)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | オートファジー / 蛍光プローブ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
オートファジーの生体における重要性は，関連分子を欠損したマウスの解析からも明らかであるが，実際に生体の『いつ，どこで活性化されているのか？』，『そのオートファジーは何を分解して，どのような生命現象に貢献しているのか？』はほとんど未解明のままである．これらの学術的問いの解明には，生体内におけるオートファジー活性の簡便な可視化が必須であるが，現在のところ，in vivoでオートファジー活性を評価できる低分子化合物は存在していない．
申請者は㈱同仁化学研究所との共同研究により，オートファジーを可視化できる低分子化合物として，DAPGreenとDALGreenの2 つのプローブの開発に成功している（FEBS let., 2018）．DALGreenはオートファジーの終着点であるオートリソソームのみを蛍光標識するのに対し，DAPGreenはそれ以前の隔離膜から蛍光標識することが可能である．すなわち，この2つのプローブの差から，オートファジー活性を評価できると予想される．
本研究では，開発した低分子化合物を改良し，簡便にin vivoオートファジー活性を可視化できるプローブの作製を目指す．
本年度の成果は以下の通りである．① ㈱同仁化学研究所との共同研究により，DAPGreenと同様の性質を持つ赤色蛍光低分子化合物DAPRedを開発した．② 既存の緑色蛍光プローブと新規に開発した赤色蛍光プローブの同時使用によってオートファジー活性を評価できることを確認した．③ 開発したプローブがin vivoのオートファジーを検出できることを確認した．④ 以上の結果を学術論文としてまとめ，投稿している．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
緑色と赤色の蛍光プローブを開発したことで簡便にオートファジー活性を評価することが可能となった．また，開発したプローブで，in vivoオートファジー検出に使用できることを明らかにできた．
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は，これらプローブを用いてマウス個体でのオートファジー活性の可視化を試みる．
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