2020 Fiscal Year Research-status Report
Elucidation of clinical significance and metastasis mechanism of circulating tumor cells undergoing EMT in lung cancer
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19K16786
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Research Institution | University of Occupational and Environmental Health, Japan |
Principal Investigator |
名部 裕介 産業医科大学, 医学部, 助教 (10813264)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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Keywords | 循環腫瘍細胞 / cell surface vimentin / 上皮間葉移行 / マイクロ流路デバイス |
Outline of Annual Research Achievements |
循環腫瘍細胞(CTC)のスタンダードな検出方法である“CellSearch System”はEpCAMをターゲットとしているため、上皮間葉移行(EMT)を起こしたCTC(EMT-CTC) の捕捉ができない。大永らが開発した国産のマイクロ流体チップ“CTC-chip”(Ohnaga T. Biomed Microdevices)は任意の捕捉抗体を結合させることができるた め、抗EpCAM抗体だけでなく、ターゲットとなる抗体を自由に結合することで様々なタイプのCTCの検出が可能である。このシステムを用いてEMT-CTCを高感度に 検出するシステム構築を本研究の目的とした。 EMTマーカーを元に上皮系性質の強い肺癌細胞株(PC-9:E-cadherin強発現、Vimentin低発現)と間葉系性質の強い肺癌細胞株(A549:E-cadherin低発現、 Vimentin高発現)を使用した。抗EpCAM抗体を用いたCTC-chip(EpCAM-chip)ではPC-9の99.4%が捕捉されたが、A549は13.4%しか捕捉できず、EpCAMをターゲットと する捕捉システムでは間葉系性質の強いCTCの捕捉効率が乏しい結果であった。そのため、EMTを起こした腫瘍細胞に特異的に発現し、Cell Surface Vimentin (CSV)に注目し、抗CSV抗体を用いたCTC-chip(CSV-chip)で同様の検討を行うと、PC-9の19.5%しか捕捉されなかったのに対して、A549は46.8%が捕捉された。 この結果からCSV-chipは間葉系性質の強いCTC、延いてはEMT-CTCの捕捉が可能なシステムであると考えられた。さらに、CTC-chip上で捕捉したCTCをCK、 hoechst、CD45による免疫蛍光染色を行い検出するシステムも確立した。 今年度は上記検出系を用いて、これまでに15症例、44回のCSV-chipによる検出を行った。また、EpCAM-chipとの関係性を評価するためにその際にEpCAM-chipにおいても検討を行った。前向きな検討であり、引き続き症例数、フォロー期間を伸ばしていくことにより、臨床歴意義を解明していく予定。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
臨床検体での検討も進んでおり、概ね順調に進んでいる。 CTCーchipからの細胞の回収、遺伝子解析に関する検討も行っており、CTCの遺伝子解析に関しても来年度進めていく予定。
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Strategy for Future Research Activity |
臨床検体での検討を継続していき、肺癌手術患者において、CSV-chipを用いて定期的(術前、術後1-3ヶ月毎)にCTCを捕捉し、術後経過と照らし合わせることにより、早期再発予 測因子となり得るか評価する。また、再発し、化学療法を施行している患者においてはCTCの数と治療効果を比較することにより治療効果予測因子となり得るか 評価する。さらに、従来のEpCAM-chipも併用することにより、癌転移を生じた患者において、上皮系マーカーを用いたCTCの捕捉数と間葉系マーカーを用いたCTC の捕捉数や比率の経時的な変化を見ることにより、癌の進展とEMTとの関連性を検討していく。 さらに、CTC-chipから回収した細胞の遺伝子解析を行うことにより、CTCのさらなる臨床的意義に関しても進めていく予定。
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Causes of Carryover |
コロナウイルスの影響で学会参加費用に使用ができず次年度使用分が生じております。 次年度に本研究の試薬購入のために使用予定です。
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Research Products
(1 results)