2020 Fiscal Year Research-status Report
大腸鋸歯状病変の発癌過程における責任分子の同定と臨床応用
| Project/Area Number |
19K17437
|
|---|
| Research Institution | Kumamoto University |
|---|
Principal Investigator |
庄野 孝 熊本大学, 病院, 非常勤診療医師 (40632667)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | SSAP / miRNA / マルチオミクス解析 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
当科における先行研究において近位側大腸のSessile Serrated Adenoma/Polyp (SSAP)から発生した大腸癌を内視鏡にて切除し、パラフィン包埋組織切片より、顕微鏡下にレーザーを用いて、正常粘膜、SSAP、癌部に分離した。それぞれからDNA、RNAを抽出し、特にmiRNAについて網羅的に定量化を行い、正常粘膜からSSAP、癌の間で発現変化したmiRNAの発現プロファイルを同定した。さらに正常粘膜、SSAP部から、より多症例の凍結生検検体を採取し、これを用いて上記miRNA発現変化の検証を行うことで、統計的に有意な変動遺伝子として3種類のmiRNAまで絞り込んだ。同定したmiRNAの一部をヒト大腸癌株細胞に導入し、メッセンジャーRNA(mRNA)発現の変化を調べたところ、上皮間葉転換（EMT）に関わるTGFβ signalingとの関連が示唆された。培養細胞による実験では、EMTの鍵遺伝子TWIST1の発現がmiR-3607 mimicにて低下、同inhibitorにて上昇し、かつmiR-3607 inhibitorにより細胞増殖が亢進した。
今年度、上記に加え、ポリープ様腺腫、LSTの内視鏡組織標本を用いて、正常部、腫瘍部に分離し、miRNA、mRNAの発現プロファイルを調べた。得られたデータを統合的に解析することで、ポリープ様腺腫、LST間で発現変動するmiRNAとその標的となる５種類のｍRNAまで絞り込んだ。このうちの1遺伝子は大腸癌細胞の腫瘍進展および予後と関連するとの報告あり、LSTに進展する腫瘍のバイオマーカーとなる可能性が示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2020度は、2019年度に引き続き内視鏡的に採取されたSSAPのmiRNA解析の検証のための症例を積み重ねることで、絞り込まれていた複数の候補遺伝子を検証し、病態が進展する際のRNA発現変化をさらに絞り込んだ。また、同時にin vitro実験を進め、発癌増殖進展機序における分子メカニズムの解明に向けて研究を進めた。
同時に、SSA/Pと対比する疾患対象としての腺腫の側方発育に関わる分子メカニズムに関しても研究を進め、候補分子を絞り込んた。
引き続き、上記の詳細を、培養細胞ならびに臨床サンプルを用いて詰めていく予定である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
2021年度は、引き続きSSAP、SSAPより発生した大腸癌、背景の正常粘膜のホルマリン固定標本、凍結標本の採取を行う。また、既に得られたmiRNAの発現解析結果を検証し、SSAPが癌へと進展するserrated pathwayの分子基盤となる責任分子とそれを制御するmiRNAを同定する計画である。
同定したmiRNA。本知見はSSA/Pの新たな診断マーカーや治療標的になる可能性がある。臨床応用としては最終的には、生体試料（内視鏡による生検検体や糞便）を用いてSSAPの早期診断バイオマーカーの開発や治療戦略を構築することを目指す。
|
| Causes of Carryover |
1)Covid-19流行の影響で、内視鏡検査による本研究の対象症例の発見件数が減少し、対象症例の内視鏡手術件数も減少した。そのため、解析数が予定より減じ、解析費用の一部が計画通りに使用されなかった。
2)標本からの核酸の抽出と解析そのものは進行しており、得られた結果の多症例による検証も進んでいる。核酸検査においては実験の効率化などにより当初計画していたよりも物品費を安く抑えることができたため未使用額が発生したが，引き続き，次年度以降も物品購入に使用する。
|
Research Products
(5 results)
