メニエール病における抗利尿ホルモンによるアクアポリン２の細胞内局在に関する研究

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K18768
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 上原 奈津美 神戸大学, 医学部附属病院, 助教 (40570502)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: メニエール病 / 内リンパ水腫 / アクアポリン

Outline of Annual Research Achievements

メニエール病の病理組織学的な特徴は内リンパ水腫である。近年、内リンパ水腫形成の機序に抗利尿ホルモン（VP）とそれによって制御されるアクアポリン2（AQP2）が深く関与することが明らかになってきた。しかしながら、腎臓で認められるような抗利尿ホルモンによるアクアポリン2の制御に関する直積的な報告は未だない。
本研究では、これらを踏まえた上で、マウスを使用し、内リンパ水腫形成にかかわる抗利尿ホルモンとアクアポリン2の関連を分子生物学的手法を用いて明らかにすることを目的としている。
本研究により内リンパ水腫形成の機序が解明されたならば、メニエール病の新しい治療法の確立にもつながる可能性がある。
初年度は、マウスを深麻酔下にホルマリンで経心灌流後腎臓および側頭骨を採取した。
ホルマリンでの浸漬固定後にEDTAにて脱灰し、凍結切片を作成した。
一次抗体を抗マウスAQP2抗体、二次抗体を蛍光抗体とし、コントロールとしてすでにアクアポリンの発現が確認されている腎臓でまずAQP2の発現を確認した。つぎに、側頭骨切片で内耳でのAQP2の発現を確認した。過去の我々の研究では、内リンパ水腫の際に浮腫をおこすのは、蝸牛血管条でありラットやモルモットでAQP2のｍRNAの発現が確認されている。しかし蛍光抗体法を用いて検討したところ、モルモットにおける蝸牛血管条のAQP2の発現は自家蛍光を消すことができず評価できなかった。今回はマウスの蝸牛血管条におけろAQP2の発現を観察している。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

免疫染色の条件設定、内耳標本作成に当初の予定よりも難渋した。

Strategy for Future Research Activity

マウスを深麻酔下に経静脈カテーテルより抗利尿ホルモンを投与し初年度の蛍光抗体法と同様の手技にて内耳血管条のAQP2の発現の経時的な変化を観察する。
また同様の条件で血管条を摘出し、ウエスタンブロット法にてAQP2蛋白の定量を行い経時的な変化を検討する。
摘出した血管条を培養液中にて24時間培養しAQP2の発現局在の経時的変化を観察、検討する。

Causes of Carryover

少額であり次年度使用額にさせていただいた。