2021 Fiscal Year Research-status Report
International collaboration study on diversity and evolution of carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa clinical isolates in Myanmar
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19KK0203
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
切替 照雄 順天堂大学, 医学部, 教授 (50192563)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
多田 達哉 順天堂大学, 医学部, 准教授 (00624644)
大城 聡 順天堂大学, 医学部, 助教 (80766379)
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| Project Period (FY) |
2019-10-07 – 2023-03-31
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| Keywords | ミャンマー / 多剤耐性緑膿菌 / 耐性因子 / 病原因子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究を通して、薬剤緑膿菌をミャンマー4施設から116株収集することができた。薬剤感受性試験及びカルバペネマーゼ産生試験を実施した結果、96株がカルバペネム耐性産生株、77株がカルバペネマーゼ産生株であった。全ゲノム解析により薬剤耐性因子及びMLST解析を行った結果、ミャンマーで分離された株の多くはST1047であった。日本やヨーロッパの流行株としてST235カルバペネム耐性緑膿菌が伝播拡大しているが、ミャンマーでは全く異なる遺伝子背景を持つカルバペネム耐性緑膿菌が多くの医療施設から分離された。この結果は、ミャンマーで分離されるカルバペネム耐性緑膿菌が独自の進化を遂げていることを示唆している。さらに、カルバペネム耐性遺伝子ではインド、中国で分離されるNDM型メタロ-β-ラクタマーゼ、DIM型メタロ-β-ラクタマーゼ、KPC型カルバペネマーゼ、GES型カルバペネマーゼをコードする遺伝子が同定された。病原因子解析においてはST1047株を用いてカイコ病原性を決定した。具体的には、多剤耐性緑膿菌株（NCGM2.S1, ST235）、感受性緑膿菌株（PAO1, ST549）ミャンマー多剤耐性緑膿菌株（ミャンマー分離株MyJU514,ST1047）を使い、カイコ感染実験におけるLD50を算出したところ、NCGM2.S1: 60CFU、PAO1: 98CFU、MyJU514： 4CFUであり、ミャンマーで分離された多剤耐性緑膿菌ST1047株では高いカイコ病原性が確認された。この高病原性株からゲノムを抽出し、大腸菌を用いてDNAライブラリーを作製、コロニーをカイコに接種することで病原因子を特定した結果、Type VI Secretion System (T6SS)の7型エフェクターを同定した。緑膿菌PAO1株を用いて本エフェクター因子欠損株を作製し、細胞変性効果（CPE）を確認したところ、欠損株ではCPEの低下がみられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2021年2月に起こったミャンマーのクーデターが起こったにもかかわらず、菌株の収集及び解析ができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は特定したエフェクター因子に対する分子疫学解析を実施する。具体的には研究代表者がこれまで収集しベトナム、ネパール及びミャンマーで分離された薬剤耐性緑膿菌のゲノム解析から得られたエフェクター遺伝子配列を基に、比較ゲノム解析を行う。この解析結果とカイコ病原性との関連を明らかにしていく。
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| Causes of Carryover |
ミャンマーでの消耗品購入が多岐にわたっているため、伝票の確認に時間を要する必要がある。
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