2011 Fiscal Year Annual Research Report
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20227009
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
西村 善文 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 教授 (70107390)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
明石 知子 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 准教授 (10280728)
長土居 有隆 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 助教 (50336591)
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| Keywords | NMR / 転写因子 / クロマチン / 動的構造 / 天然変性状態 |
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| Research Abstract |
1. 15N,13C,2Hでラベルしたヒストンを調製しH2A/H2B複合体のTROSY-NMRの測定を行った。H2Aラベル体とH2B非ラベル体の組み合わせとH2A非ラベル体とH2Bラベル体の組み合わせでNMRのシグナルを帰属した。帰属に基づいてH2AとH2Bの2次構造を同定した。結晶解析されているヌクレオソーム中の構造と比較したところH2AのN末とC末のヘリックスはヘテロ2量体では形成されていなかった。またヒストンシャペロンNAP1やMAP2のC末の酸性領域との相互作用をNMRで解析した。ヒストンシャペロンのC末の天然変変性領域がヒストンとの相互作用で重要であることを見出した。
2. ヒストンH2Aを安定同位体でラベルし、H2B、H3、H4は非ラベル体でDNAとの複合体のヌクレオソームを調製し固体NMRの測定を開始した。
3. 基本転写因子のTFIIBの全長でのTFIIEのαサブユニットのC末酸性ドメイン部分の構造をNMRで決定した。その結果フレキシブルなリンカーで結ばれたC末酸性ドメインはドメイン単独の時と同じ構造である事が判った。
4. TRF2の2量体形成ドメインをシステインのSS結合でモデル化した塩基性2量体ドメインでDNAとの相互作用を解析した。2量体塩基性ドメインはでホリデージャンクションDNAと結合することを見出した。
5. Chp1のN末を伸ばしたクロモドメインのH3K9me化ペプチドとの複合体の構造をNMRで決定した。クロモドメインのみの複合体構造と比較してN末に新たなヘリックスの形成が認められた。この複合体構造上にセントロメアの非コードRNA(ncRNA)との結合部位をマップした。その結果クロモドメインのC末酸性領域に加えて、N末の新たなヘリックス領域も相互作用に関与している事を見出した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ヒストンH2A/H2BとヒストンシャペロンNAP1やNAP2の天然変性領域との相互作用や、HP1やChp1クロモドメインのフレキシブルなN末テイル領域の相互作用における役割や、TRF2のN末の天然変性塩基性ドメインのDNAとの相互作用や、TFIIEの全長での天然変性領域の機能解析等が進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
ヒストンH2A/H2Bとヒストンシャペロンの天然変性領域のアミノ酸変異体との相互作用構造、クロモドメインの天然変性領域の欠損変異体やリン酸化体の動的構造、TRF2のN末天然変性領域のアミノ酸変異体のDNAとの動的構造、TFIIEの全長での天然変性領域の動的な相互作用構造を解析を進行していく。
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[Presentation] Structural biology on Chromatin-related proteins2011
Author(s)
Yoshifumi Nishimura, Hideaki Shimojo, Ayumi Kawaguchi, Masahiko Okuda, Yoshihito Moriwaki, Katsuya Iizumi, Aritaka Nagadoi
Organizer
The 4th Asia-Pacific NMR Symposium (The 4th APNMR Symposium)アジア・太平洋NMEシンポジウム
Place of Presentation
Beijing Central Garden Hotel(中国北京)中国北京
Year and Date
20111016-20111019
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[Presentation] Characterization of histone multimers by ESI-MS2011
Author(s)
Singo Shimoyama, Yuki Asano, Kyohei Takahashi, Hiroaki Tachiwana, Aritaka Nagadoi, Hitoshi Kurumizaka, Yoshifumi Nishimura, Satoko Akashi
Organizer
59th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics
Place of Presentation
コロラドコンベンションセンターデンバー・コロラド州(アメリカ)
Year and Date
20110605-20110609
