2008 Fiscal Year Annual Research Report
中心体とM期の連動を制御するキナーゼ複合体の機能解析
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20370081
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
野島 博 Osaka University, 微生物病研究所, 教授 (30156195)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
薮田 紀一 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (10343245)
奥崎 大介 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (00346131)
笠間 隆志 大阪大学, 微生物病研究所, 特任研究員 (20456932)
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| Keywords | 細胞周期 / 中心体 / 紡錘体形成チェックポイント / LATS2 / GAK / Cyclin G / PP2A B'alpha / リン酸化 |
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| Research Abstract |
GAK関連ではGAKが細胞質だけでなく核にも局在し、cyclin G1、p53、クラスリン重鎖(CHC)およびPP2A B'α1サブユニットと複合体を形成していること、およびGAKがB'α1のN端をリン酸化していることを見出した。p53に異常が生じていないヒトがん細胞由来U2OS細胞における非リン酸化型B'α1の変異体の過剰発現はGAK-KDと共に内在性のB'α1の活性を無効にし、脱リン酸化標的タンパク質であるp53、MDM2、CHK2の安定性を減少させた。逆に常時活性型B'α1変異体の過剰発現は安定性を増加させた。一方、p53が異常な293T細胞では非リン酸化型変異体の過剰発現によりT抗原のp53に対する結合が阻害された。これによりp53の不活性状態は解除され、γ線照射によるDNA損傷に伴ったp53の活性化が起こると考えられる。Lats2関連ではM期においてAurora-AキナーゼがLats2のN末領域の異なる3箇所のアミノ酸残基をリン酸化することで異なる分裂装置上へ局在させることなどを見出した。これらの結果は、Aurora-Aによる複数のリン酸化がLats2のダイナミックなM期局在を制御していることを示唆している。またsiRNAにより内在性Lats2あるいはLats1をノックダウンすると細胞質分裂の異常が観察された。またLats2ノックダウン細胞においてCPC(Chromosomal Passenger Complex)のM期局在制御が異常になることを発見した。さらにLats1^<-/-,>Lats2^<-/->のダブルノックアウト(DKO)マウス作製したところ、予測どおり胎生致死であった。その原因を詳細に調べた結果、Lats2とLats1が協調して着床前の胚発生過程に不可欠な役割を果たしていることを見出した。また、Lats2の心臓発生における役割についても解析した。
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