| Research Abstract |
天然酵素は,「遷移状態の安定化」に加え,「一般酸・塩基触媒」,「求核触媒」,「金属触媒」などの複数の触媒因子を使って,高い反応効率を獲得している.しかしながら,我々のこれまでの研究結果が示しているように,これまでの抗体酵素は,単一の触媒因子(遷移状態の安定化)で反応を触媒しているため,その活性は低いものにとどまっている.この原因の一つに,従来の方法では単独の遷移状態アナログを使用して抗体を作製するために,複数の触媒因子を導入することが困難なことが挙げられる.そこで,本提案では,2種類のリン酸型遷移状態アナログを組み合わせた二重免疫法により,抗原結合部位における分子認識の最適化を検討した.
1.ハプテンの合成:リン酸ジエステル(1および2)を合成しKLHやBSAと結合させ,ハプテンコンジュゲートを作製する.
2.二重免疫:ハプテンコンジュゲートをマウスに免疫する.1,1,1,2の順にマウスに免疫を行った.
3.細胞融合,モノクローン化,および抗体の精製:電気細胞融合装置を用いて,ミエローマ細胞と脾臓細胞との細胞融合を行った.ハイブリドーマをクローニングによりモノクローンとして,それぞれのハイブリドーマを大量培養した.抗体は,プロテインGカラムを用いてFPLCにより精製した.
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