2009 Fiscal Year Annual Research Report
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20590332
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| Research Institution | Health Sciences University of Hokkaido |
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Principal Investigator |
太田 亨 Health Sciences University of Hokkaido, 個体差健康科学研究所, 准教授 (10223835)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
及川 恒之 北海道医療大学, 心理科学部, 教授 (80150241)
長田 和実 北海道医療大学, 歯学部, 准教授 (00382490)
山田 崇弘 北海道大学, 大学病院, 助教 (20419948)
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| Keywords | マウスモデル / 薬剤耐性遺伝子 |
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| Research Abstract |
ABCC11遺伝子はヒト耳垢型決定遺伝子ばかりでなく、腋臭やアポクリン腺分泌、また、薬剤耐性に関わるなど、興味ある機能を持っている。
マウスにはABCC11遺伝子がなく、自然の欠失モデルである。マウスにヒトABCC11遺伝子を挿入しその表現型や分子生物学的機序を解明することを目的として研究を開始した。
BACデータベースから検索し、ヒトABCC11遺伝子を含むBACクローンを得た。このクローンは隣接するABCC12遺伝子も含み、遺伝子の上流・下流ともに十分なゲノムを含むため、発現調節領域、プロモーター領域は含まれると思われる。このBACクローンにハイグロマイシン耐性遺伝子をベクター内に組み込みTransgeneを作製した。
未分化に保つ培養液下、129cvマウスES細胞に上記のTransgeneを挿入させ、ハイグロマイシン添加2週間後、BAC transgene陽性ESクローンを20個以上得た。このクローンを長期培養しゲノムにおけるTransgeneの挿入状態・発現を確認したところ、TransgeneのESクローン陽性率が培養ごとに低下していることが判明した。そのため安定して挿入されていない可能性があり、再びエレクトロぽレーション法などで、より効率よくtransgene挿入ES細胞作製にとりかかっている。
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