2008 Fiscal Year Annual Research Report
消化器癌に対するTGF-βsiRNA導入樹状細胞による新規免疫遺伝子治療の開発
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20591533
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
中村 公紀 Wakayama Medical University, 医学部, 助教 (80364090)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (20191190)
岩橋 誠 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (70244738)
中森 幹人 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (10322372)
松田 健司 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (30398458)
中 禎二 和歌山県立医科大学, 医学部, 学内助教 (00453184)
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| Keywords | 樹状細胞 / TGF-β / adenovirus vector / siRNA / 免疫遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
本研究は、癌局所の免疫環境において,細胞傷害性Tリンパ球(CTL)の誘導を増強させる一方、免疫抑制作用を有するTGF-βの作用を制御することにより消化器癌の癌免疫療法の有効性を高めることを目的としている。
1.TGF-βsiRNAおよびヒトCEA発現adenovirus vectorの作製および調整
合成TGF-βsiRNAを用いてAdeno-X Expression SystemによりTGF-βsiRNA発現adenovirus vector(AxTGF-βsiRNA)を作製した。今後、TGF-βsiRNAの発現確認を行う。また,CEA遺伝子導入adenovirus vector(AxCACEA)とマウスGM-CSF遺伝子導入adenovirus vector(AxCAmGM-CSF)は,当教室で作製したものを使用し、CEAの発現、mGM-CSFの産生を確認した。
2.C57BL/6J-TgN(CEAGe)18FJPマウス(TgCEA)の骨髄細胞よりDCの誘導と遺伝子導入
TgCEAマウスの大腿骨,脛骨より骨髄細胞を採取し(約2×10^7/mouse),200U/mlのマウスGM-CSF(mGM-CSF)存在下に10-12日間培養後浮遊細胞を回収した.誘導したDCに種々のMOIでadenovirus vector(AxCACEA,AxCAmGM-CSF)を遠心法(2000g,37℃,2hr)を用いて感染さ,それぞれの至適MOIを確認した.
本年度はベクターの作製に予想外の時間を費やすことなり,当初の計画目標には達しないが,次年度は,TGF-βsiRNAの発現確認,遺伝子導入DC接種TgCEAにおけるCTLの誘導能の検討,および皮下腫瘍モデルにおける抗腫瘍効果の検討を行う予定である.
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