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2020 Fiscal Year Annual Research Report

Elucidation and Control of Local Fractions in Protein Engineering

Research Project

Project/Area Number 20H02531
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

津本 浩平  東京大学, 大学院工学系研究科(工学部), 教授 (90271866)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 長門石 曉  東京大学, 医科学研究所, 特任准教授 (30550248)
黒田 大祐  東京大学, 大学院工学系研究科(工学部), 講師 (60756732)
中木戸 誠  東京大学, 大学院工学系研究科(工学部), 講師 (80784511)
Project Period (FY) 2020-04-01 – 2023-03-31
Keywords蛋白質エンジニアリング / ダイナミクス / 抗体
Outline of Annual Research Achievements

本研究では、変異導入、柔軟性変化、小型化、コンジュゲーションにおける蛋白質エンジニアリングに伴うローカルなフラクチュエーション変化が、コンホメーショナルアンサンブルの多様性を増大させ、その結果、新しい相互作用界面の出現、分子認識の多様性を生み出すのではないかと考え、標的蛋白質の分子認識に関するフラクチュエーションの物理化学的パラメータ(ΔH, ΔS, ΔG, kon, koffなど)を解析し、動力学計算と共に相互作用に関する精密な議論を行うことにより、標的とする蛋白質の機能性向上、分子認識変化、反応場適合を考察、ローカルフラクチュエーションという独自の観点からの分子設計並びに実験的検証を通じて、新規な分子デザインの指針を提案する。
本年度の成果としては、(Project A) 金属イオンの有無で、結合親和性と共に速度論パラメータも変化することが明らかとなり、ALaスキャンより結合親和性創出に重要なアミノ酸の種類が、金属イオンの有無により異なることが示唆された。(Project B) 切り出しただけのフラグメントペプチドでは抗原に対する結合活性はなかったが、N末端とC末端を連結することにより環状型のペプチドを作製し結合解析を行ったところ、結合活性を示すものと、示さないものがあることが明らかになった。(Project C) 抗体の種類によってFcγRIIIaに対する結合活性、その速度論パラメータが有意に異なることが示された。
(Project D) 溶液中では抗体間で差異がなかった結合親和性および物理化学的なパラメータが、固定化系では結合親和性と共に速度論パラメータにも有意な差異があることが明らかとなった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

(Project A) 金属イオン存在下と非存在下におけるSonic hedgehog(SHH)の柔軟性変化が、抗原として抗SHH抗体と結合する際に及ぼす影響を物理化学的な相互作用解析に基づき解析を行った。その結果、金属イオンの有無で、結合親和性と共に速度論パラメータも変化することが明らかとなった。既知の共結晶構造情報を基にALaスキャンを行ったところ、結合親和性創出に重要なアミノ酸の種類が、金属イオンの有無により異なることが示唆された。
(Project B) シングルドメイン抗体(sdAb)の抗原結合部位である可変領域CDRをフラグメント化した分子について、標的抗原との精密な相互作用解析を行った。その結果、切り出しただけのフラグメントペプチドでは抗原に対する結合活性はないことが分かった。このフラグメントペプチドのN末端とC末端を連結することにより環状型のペプチドを作製し結合解析を行ったところ、結合活性を示すものと、示さないものがあることが明らかになった。
(Project C) FcγRIIIaと抗体との速度論解析を実施し、その物理化学パラメータの解析を行った。その結果、抗体の種類によってFcγRIIIaに対する結合活性、その速度論パラメータが有意に異なることが示された。
(Project D) FcγRIIIaが固定化されている状態と溶液中で分散している状態とでの、抗体に対する分子認識機構の相違を評価するために、C末端側が固定化されたFcγRIIIaに関する相互作用解析を行った。その結果、溶液中では抗体間で差異がなかった結合親和性および物理化学的なパラメータが、固定化系では結合親和性と共に速度論パラメータにも有意な差異があることが明らかとなった。

Strategy for Future Research Activity

(Project A) 金属イオン存在下と非存在下におけるSonic hedgehog(SHH)の柔軟性変化が、抗原として抗SHH抗体と結合する際に及ぼす影響を物理化学的な相互作用解析に基づき考察する。そこで分子動力学計算を導入し、SHHの金属有無しにおける蛋白質としてのダイナミクスの相違点を抽出し、相互作用に関わるローカルフラクチュエーションの特定を試みる。
(Project B) シングルドメイン抗体(sdAb)の抗原結合部位である可変領域CDRをフラグメント化した分子について、標的抗原との精密な相互作用解析を行う。複数の環状化パターンを検討し、各CDRフラグメントと環状化パターンとの相互関係を明らかにする。
(Project C) Fc受容体FcγRIIIaの遺伝子多型が相互作用に及ぼす影響を詳細に解析し、ローカルコンホメーション変化との関連性を精密に議論する。特に各種 FcγRIIIaと抗体との速度論解析を実施し、その物理化学パラメータ変化と、分子動力学計算を活用した
FcγRIIIaのフラクチュエーション変化との関連性を見出す。
(Project D) FcγRIIIaが固定化されている状態と溶液中で分散している状態とでの、抗体に対する分子認識機構の相違を詳細に解析する。C末端側が固定化されたFcγRIIIaに関する物性・構造を精密に解析する。特に動力学計算において、固定化されたFcγRIIIaの
動的な構造解析により、FcγRIIIaのローカルフラクチュエーションに関する知見を収集する。

  • Research Products

    (43 results)

All 2021 2020 Other

All Journal Article (15 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 1 results) Presentation (22 results) (of which Invited: 6 results) Book (4 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] A new twist of rubredoxin function in M. tuberculosis2021

    • Author(s)
      Sushko Tatsiana、Kavaleuski Anton、Grabovec Irina、Kavaleuskaya Anna、Vakhrameev Daniil、Bukhdruker Sergey、Marin Egor、Kuzikov Alexey、Masamrekh Rami、Shumyantseva Victoria、Tsumoto Kouhei、Borshchevskiy Valentin、Gilep Andrei、Strushkevich Natallia
    • Journal Title

      Bioorganic Chemistry

      Volume: 109 Pages: 104721~104721

    • DOI

      10.1016/j.bioorg.2021.104721

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Molecular basis for the activation of actinoporins by lipids2021

    • Author(s)
      Caaveiro Jose M.M.、Tsumoto Kouhei
    • Journal Title

      Methods Enzymol.

      Volume: 649 Pages: 277~306

    • DOI

      10.1016/bs.mie.2021.01.008

  • [Journal Article] Anti-EGFR antibody 528 binds to domain III of EGFR at a site shifted from the cetuximab epitope2021

    • Author(s)
      Makabe Koki、Yokoyama Takeshi、Uehara Shiro、Uchikubo-Kamo Tomomi、Shirouzu Mikako、Kimura Kouki、Tsumoto Kouhei、Asano Ryutaro、Tanaka Yoshikazu、Kumagai Izumi
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 11 Pages: 5790

    • DOI

      10.1038/s41598-021-84171-3

  • [Journal Article] Thermodynamic Dissection of Potency and Selectivity of Cytosolic Hsp90 Inhibitors2021

    • Author(s)
      Yoshimura Chihoko、Nagatoishi Satoru、Kuroda Daisuke、Kodama Yasuo、Uno Takao、Kitade Makoto、Chong-Takata Khoontee、Oshiumi Hiromi、Muraoka Hiromi、Yamashita Satoshi、Kawai Yuichi、Ohkubo Shuichi、Tsumoto Kouhei
    • Journal Title

      Journal of Medicinal Chemistry

      Volume: 64 Pages: 2669~2677

    • DOI

      10.1021/acs.jmedchem.0c01715

  • [Journal Article] Structural basis for selective inhibition of human serine hydroxymethyltransferase by secondary bile acid conjugate2021

    • Author(s)
      Ota Tomoki、Senoo Akinobu、Shirakawa Masumi、Nonaka Hiroshi、Saito Yutaro、Ito Sho、Ueno Go、Nagatoishi Satoru、Tsumoto Kouhei、Sando Shinsuke
    • Journal Title

      iScience

      Volume: 24 Pages: 102036~102036

    • DOI

      10.1016/j.isci.2021.102036

  • [Journal Article] Proteomic identification and validation of novel interactions of the putative tumor suppressor PRELP with membrane proteins including IGFI-R and p75NTR2021

    • Author(s)
      Kosuge Hirofumi、Nakakido Makoto、Nagatoishi Satoru、Fukuda Tetsuya、Bando Yasuhiko、Ohnuma Shin-ichi、Tsumoto Kouhei
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry

      Volume: 296 Pages: 100278~100278

    • DOI

      10.1016/j.jbc.2021.100278

  • [Journal Article] Structural basis for antigen recognition by methylated lysine?specific antibodies2021

    • Author(s)
      Ishii Misaki、Nakakido Makoto、Caaveiro Jose M.M.、Kuroda Daisuke、Okumura C.J.、Maruyama Toshiaki、Entzminger Kevin、Tsumoto Kouhei
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry

      Volume: 296 Pages: 100176~100176

    • DOI

      10.1074/jbc.RA120.015996

  • [Journal Article] Structural Basis for the Binding Mechanism of Human Serum Albumin Complexed with Cyclic Peptide Dalbavancin2020

    • Author(s)
      Ito Sho、Senoo Akinobu、Nagatoishi Satoru、Ohue Masahito、Yamamoto Masaki、Tsumoto Kouhei、Wakui Naoki
    • Journal Title

      Journal of Medicinal Chemistry

      Volume: 63 Pages: 14045~14053

    • DOI

      10.1021/acs.jmedchem.0c01578

  • [Journal Article] Structure-based design and discovery of novel anti-tissue factor antibodies with cooperative double-point mutations, using interaction analysis2020

    • Author(s)
      Chiba Shuntaro、Tanabe Aki、Nakakido Makoto、Okuno Yasushi、Tsumoto Kouhei、Ohta Masateru
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 10 Pages: 17590

    • DOI

      10.1038/s41598-020-74545-4

  • [Journal Article] Unique Electronic Structures of the Highly Ruffled Hemes in Heme-Degrading Enzymes ofStaphylococcus aureus, IsdG and IsdI, by Resonance Raman and Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopies2020

    • Author(s)
      Takahashi Satoshi、Nambu Shusuke、Matsui Toshitaka、Fujii Hiroshi、Ishikawa Haruto、Mizutani Yasuhisa、Tsumoto Kouhei、Ikeda-Saito Masao
    • Journal Title

      Biochemistry

      Volume: 59 Pages: 3918~3928

    • DOI

      10.1021/acs.biochem.0c00731

  • [Journal Article] The Kg‐antigen, RhAG with a Lys164Gln mutation, gives rise to haemolytic disease of the newborn2020

    • Author(s)
      Tanaka Mitsunobu、Abe Takaaki、Minamitani Takeharu、Akiba Hiroki、Horikawa Toshihiro、Tobita Ryutaro、Isa Kazumi、Ogasawara Kenichi、Takahashi Hideo、Tateyama Hidemi、Tone Satomi、Tsumoto Kouhei、Yasui Teruhito、Kimura Takafumi、Fujimura Yoshihiro、Hirayama Fumiya、Tani Yoshihiko、Takihara Yoshihiro
    • Journal Title

      British Journal of Haematology

      Volume: 191 Pages: 920~926

    • DOI

      10.1111/bjh.16955

  • [Journal Article] Polymeric Nanocarriers with Controlled Chain Flexibility Boost mRNA Delivery In Vivo through Enhanced Structural Fastening2020

    • Author(s)
      Miyazaki Takuya、Uchida Satoshi、Nagatoishi Satoru、Koji Kyoko、Hong Taehun、Fukushima Shigeto、Tsumoto Kouhei、Ishihara Kazuhiko、Kataoka Kazunori、Cabral Horacio
    • Journal Title

      Advanced Healthcare Materials

      Volume: 9 Pages: 2000538~2000538

    • DOI

      10.1002/adhm.202000538

  • [Journal Article] Dual-Sensitive Nanomicelles Enhancing Systemic Delivery of Therapeutically Active Antibodies Specifically into the Brain2020

    • Author(s)
      Xie Jinbing、Gonzalez-Carter Daniel、Tockary Theofilus A.、Nakamura Noriko、Xue Yonger、Nakakido Makoto、Akiba Hiroki、Dirisala Anjaneyulu、Liu Xueying、Toh Kazuko、Yang Tao、Wang Zengtao、Fukushima Shigeto、Li Junjie、Quader Sabina、Tsumoto Kouhei、Yokota Takanori、Anraku Yasutaka、Kataoka Kazunori
    • Journal Title

      ACS Nano

      Volume: 14 Pages: 6729~6742

    • DOI

      10.1021/acsnano.9b09991

  • [Journal Article] Highly sensitive HPLC analysis and biophysical characterization of N‐glycans of IgG‐Fc domain in comparison between CHO and 293 cells using FcγRIIIa ligand2020

    • Author(s)
      Kosuge Hirofumi、Nagatoishi Satoru、Kiyoshi Masato、Ishii‐Watabe Akiko、Tanaka Toru、Terao Yosuke、Oe Seigo、Ide Teruhiko、Tsumoto Kouhei
    • Journal Title

      Biotechnology Progress

      Volume: 36 Pages: e3016

    • DOI

      10.1002/btpr.3016

  • [Journal Article] 64Cu-labeled minibody D2101 visualizes CDH17-positive gastric cancer xenografts with short waiting time2020

    • Author(s)
      Fujiwara Kentaro、Akiba Hiroki、Tsuji Atsushi B.、Sudo Hitomi、Sugyo Aya、Nagatsu Kotaro、Zhang Ming-Rong、Iwanari Hiroko、Kusano-Arai Osamu、Kudo Shota、Kikuchi Chika、Tsumoto Kouhei、Momose Toshimitsu、Hamakubo Takao、Higashi Tatsuya
    • Journal Title

      Nuclear Medicine Communications

      Volume: Publish Ahead of Print Pages: 688-695

    • DOI

      10.1097/MNM.0000000000001203

  • [Presentation] 化膿連鎖球菌由来金属獲得蛋白質MtsAに対する機能阻害剤の探索2021

    • Author(s)
      中木戸 誠、竹内 美結、長門石 曉、相川 知宏、中川 一路、津本 浩平
    • Organizer
      第94回 日本細菌学会総会
  • [Presentation] 次世代医薬品開発と蛋白質科学2021

    • Author(s)
      津本浩平
    • Organizer
      CIBoG特別
  • [Presentation] バイオスペリア時代の抗体エンジニアリリング2020

    • Author(s)
      津本浩平
    • Organizer
      BioJapan 2020
    • Invited
  • [Presentation] 相互作用の熱力学的解析とCOVID-192020

    • Author(s)
      津本浩平
    • Organizer
      CBI学会2020年大会
    • Invited
  • [Presentation] 抗体医薬と蛋白質物性:製剤技術研究への期待2020

    • Author(s)
      津本浩平
    • Organizer
      製剤機械技術学会30周年記念大会
    • Invited
  • [Presentation] 病原性微生物における金属動態の分子機構解析2020

    • Author(s)
      津本浩平
    • Organizer
      2020年度iBIX-JAXA-KEK物構研-QST合同研究会
    • Invited
  • [Presentation] 日米セッション/先端創薬への分析ソリューション-その先にあるもの(Beyond Biopharma Analysis)2020

    • Author(s)
      津本浩平
    • Organizer
      JASIS WebExpoライフサイエンスイノベーションゾーン企画
    • Invited
  • [Presentation] 新興・再興感染症対策への抗体エンジニアリングの貢献2020

    • Author(s)
      津本浩平
    • Organizer
      ナノメディシン交流協会臨時会議「コロナウィルス感染症とナノメディシン」
    • Invited
  • [Presentation] 蛋白質-蛋白質間相互作用の速度論的制御に基づくP-カドヘリンの細胞接着形成阻害2020

    • Author(s)
      妹尾 暁暢、長門石 曉、黒田 大祐、伊藤 翔、上野 剛、齋藤 雄太朗、吉田 浩平、田島 卓実、工藤 翔太、山東 信介、津本 浩平
    • Organizer
      第14回 バイオ関連化学シンポジウム
  • [Presentation] 化膿連鎖球菌の金属獲得蛋白質MtsAに対する機能阻害剤の探索2020

    • Author(s)
      竹内 美結、中木戸 誠、長門石 曉、河出 来時、相川 知宏、中川 一路、津本 浩平
    • Organizer
      第93回 日本生化学会大会
  • [Presentation] aHUSに関連する補体抑制因子CFHと特異的抗体の機能解析2020

    • Author(s)
      横尾 尚典、田部 亜季、中木戸 誠、長門石 曉、吉田 瑶子、池田 洋一郎、南学 正臣、津本 浩平
    • Organizer
      第93回 日本生化学会大会
  • [Presentation] 計算デザイン Supercharging 抗体の物性機能解析2020

    • Author(s)
      笠原 慶亮、黒田 大祐 、河出 来時 、田部 亜季 、長門石 曉 、津本 浩平
    • Organizer
      第48回 構造活性相関シンポジウム
  • [Presentation] HDX-MSを活用したP-カドヘリンのホモ複合体に対する低分子阻害剤開発2020

    • Author(s)
      妹尾 暁暢、長門石 曉、伊藤 翔、上野 剛、津本 浩平
    • Organizer
      第16回 日本臨床プロテオゲノミクス研究会
  • [Presentation] Obtaining antibodies against Staphyloccus aureus2020

    • Author(s)
      Valenciano S, Sandra Bellido, Jose M.M. Caaveiro, Nakakido M, Nagatoishi S, Tsumoto K
    • Organizer
      2020年度 医科学研究所G2発表会
  • [Presentation] Application of β-hairpin structure of VHH CDR3 for peptide designs2020

    • Author(s)
      山本 晃一、中木戸 誠、黒田 大祐、長門石 曉、森本 淳平、山東 信介、津本 浩平
    • Organizer
      2020年度 医科学研究所G2発表会
  • [Presentation] Proteomic Identification And Validation Of New Interactions Of Novel Tumor Suppressor PRELP With Membrane Proteins2020

    • Author(s)
      Kosuge H, Nakakido M, Nagatoishi S, Fukuda T, Bando Y, Ohnuma S, Tsumoto K
    • Organizer
      第20回 日本蛋白質科学会年会
  • [Presentation] Structural analysis of a peptide fragment grafted onto the Adhiron scaffold2020

    • Author(s)
      住川 太一、中木戸 誠、黒田 大祐、津本 浩平
    • Organizer
      第20回 日本蛋白質科学会年会
  • [Presentation] Inhibition of P-cadherin-mediated cell contact formation through the kinetic effect of chemical fragment2020

    • Author(s)
      妹尾 暁暢、齋藤 雄太朗、伊藤 翔、長門石 曉、上野 剛、吉田 浩平、田島 卓実、工藤 翔太、山東 信介、津本 浩平
    • Organizer
      第20回 日本蛋白質科学会年会
  • [Presentation] The Molecular Basis of How SNP in LI-cadherin Affected Cancer Metastasis2020

    • Author(s)
      由井 杏奈、菊池 智佳、郷田 秀一郎、工藤 翔太、秋葉 宏樹、中木戸 誠、黒田大祐、長門石 曉、新井 修、岩成 宏子、浜窪 隆雄、津本 浩平
    • Organizer
      第20回 日本蛋白質科学会年会
  • [Presentation] 分子動力学シミュレーションを用いたCDR-Graftingによる合成VHHにおける分子挙動の解析2020

    • Author(s)
      木下 清晶、中木戸 誠、黒田 大祐、カアベイロ ホセ、津本 浩平
    • Organizer
      第58回 日本生物物理学会年会
  • [Presentation] Molecular basis of increased risk of colorectal cancer metastasis caused by SNPs in LI-cadherin2020

    • Author(s)
      由井 杏奈、菊池 智佳、郷田 秀一郎、丸野 孝浩、内山 進、中木戸 誠、黒田大祐、長門石 曉、新井 修、岩成 宏子、浜窪 隆雄、津本 浩平
    • Organizer
      第58回 日本生物物理学会年会
  • [Presentation] VHH抗体β-hairpin型CDR3を利用したペプチド設計手法の探索2020

    • Author(s)
      山本晃一、中木戸 誠、黒田 大祐、長門石 曉、森本 淳平、山東 信介、津本 浩平
    • Organizer
      第43回 日本分子生物学会年会
  • [Book] 生命金属ダイナミクス~生体内における金属の挙動と制御~2021

    • Author(s)
      中木戸誠, 津本浩平
    • Total Pages
      564
    • Publisher
      エヌ・ティー・エス
    • ISBN
      9784860437060
  • [Book] 膜タンパク質工学ハンドブック2020

    • Author(s)
      由井杏奈, 妹尾暁暢, 長門石曉, 津本浩平
    • Total Pages
      624
    • Publisher
      エヌ・ティー・エス
    • ISBN
      9784860435370
  • [Book] 熱量測定・熱分析ハンドブック 第3版2020

    • Author(s)
      長門石曉, 津本浩平
    • Total Pages
      363
    • Publisher
      日本熱測定学会
    • ISBN
      9784621305072
  • [Book] 機器分析ハンドブック 2 高分子・分離分析編2020

    • Author(s)
      中木戸誠, 長門石曉, 津本浩平
    • Total Pages
      192
    • Publisher
      化学同人
    • ISBN
      9784759820225
  • [Remarks] 低用量抗体医薬によるアルツハイマー型認知症の治療を可能にするスマートナノマシン®の分子設計

    • URL

      https://www.t.u-tokyo.ac.jp/soe/press/setnws_202005221518051384769979.html

  • [Remarks] 環状ペプチドのヒト血清アルブミンに対する結合様式を解明~環状ペプチド創薬の加速に期待~

    • URL

      https://www.t.u-tokyo.ac.jp/foe/press/setnws_202011131700347992632312.html

URL: 

Published: 2021-12-27  

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