2023 Fiscal Year Research-status Report
新規天然蛍光イメージリング剤の創出と生細胞内動的解析
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20K05736
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
大崎 愛弓 日本大学, 文理学部, 教授 (50161360)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
福山 愛保 徳島文理大学, 薬学部, 客員教授 (70208990)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 植物成分 / 蛍光化合物 / 蛍光特性 / 細胞導入 / 蛍光イメージリング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
多環アルカロイドの蛍光を調べる目的で，独自に構築した天然エキスライブラリ2000種について，蛍光スクリーニングを行った。その結果，いくつかの検体が強い蛍光を有することが明らかとなった。その一つである生薬，ゴシュユ（呉茱萸，Tetradiun ruticarpum，ミカン科）は，健胃鎮痛利尿作用があるとして，果実を用いている。ゴシュユの果実 505ｇを，粉砕し，メタノールにて抽出し，シリカゲルクロマトグラフィー(Ｗako gel C-300)を行い分画したのち，強い発色を持つ分画部に対して，逆相HPLC(Ｃosmosil 5Ｃ18ＭS-ＩI，Cosmosil PBr, Chromatorex NH)を用いて，蛍光化合物の精製を行った。その結果6種の化合物を単離し，各々のＮＭＲデータから，rutaecarpine (1), evodiamine (2), hydroxyrutaecarpine (3), 5-methoxy-10-hydroxy-dimethyltryptamine (4), dehydrorutaecarpine (5), goshuyuamide II (6),であると同定した。これらの化合物に対して4種の溶媒（ＣＨＣｌ3，ＣＨ３ＣＮ，ＭｅＯＨ，Ｈ２Ｏ）における溶媒特性について検討をおこなった。Ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ誘導体としての骨格に注目すると，C-14とC-14aで形成するIndol unitとQuinazilinone unitの共役系の存在が，蛍光強度に影響していることが分かった。単離収量の多い化合物１を用いて，ＨｅＬａ細胞への染色を行った結果，生細胞への導入は，その毒性からかうまくいかなかったが，エタノール固定を行うことにより，うまく細胞染色を行うことができ，その染色は鮮明である，細胞全体に認められた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
これまでの研究において，N含有多環アルカロイドおよびNを含有していない天然蛍光物質の両方から，広く植物成分の蛍光成分について研究を行ってきた。これらの蛍光化合物をライブラリ化し，今後の研究に資する形でまとめることが出来ている。しかしながら，広範な研究を行ったこともあり，それらのデータ整理と，学会発表，投稿論文の作成に遅れが生じているので，それらのデータをまとめるために次年度に持ち越すこととした。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでに100種以上の天然蛍光物質を得て，それらの構造を確定してきた。
得られた天然蛍光化合物を整理し，天然蛍光化合物の独自のライブラリとして保存するとともに，それらのスペクトルデータを整理する。
これまでの実験結果をもとに化合物の蛍光特性を整理し，細胞内での挙動を明らかとし，まとめる作業を行う。
天然蛍光を持つ植物ごとに国内外での学会発表を行う。さらに論文の投稿を行っていく予定である。
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| Causes of Carryover |
これまで多くの天然蛍光化合物を得てきたが，それらのデータの確認作業と，独自の蛍光ライブラリの構築，および国内外の学会発表と論文作成のため，残金を次年度に延長し，使用することとした。年度内にデータの確認とまとめを行う予定であったが，間に合わなかったため。
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