2021 Fiscal Year Research-status Report
Elucidation of the infection mechanism of Trichosporon asahii, a pathogenic fungus resident in the environment
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20K07022
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| Research Institution | Meiji Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
松本 靖彦 明治薬科大学, 薬学部, 准教授 (60508141)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | トリコスポロン・アサヒ / カイコ / 感染症 / 遺伝子組換え |
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| Outline of Annual Research Achievements |
トリコスポロン・アサヒは、好中球が減少した患者に対しては重篤な深在性真菌症を引き起こす臨床上問題となっている病原真菌である。しかし、これまでにトリコスポロン・アサヒの病原性を評価するための感染動物モデルがなく、またトリコスポロン・アサヒの遺伝子組換え技術が確立されていないことから分子生物学的なアプローチでトリコスポロン・アサヒの感染機構が解明されていなかった。
本研究の目的は、環境常在性の病原真菌であるトリコスポロンの感染機構を分子生物学的に解明することである。
令和２年度では、簡便にトリコスポロン・アサヒの病原性を評価するためのカイコ感染モデルの確立に成功した。また、アグロバクテリウムを用いた遺伝子導入法によりトリコスポロン・アサヒにGFPを発現させることに成功した。
令和３年度では、トリコスポロン・アサヒの遺伝子欠損株を作製するための方法を確立した。令和２年度に確立したアグロバクテリウムを用いた遺伝子導入法を用いて、非相同組換え修復に関与するKu70タンパク質をコードするku70遺伝子の欠損株を樹立した。このku70遺伝子欠損株は、野生株より標的とする遺伝子領域に対する相同組換え効率が上昇していた。これは、Ku70タンパク質を介した非相同末端連結による非特異な遺伝子挿入が起こらなくなり、標的とする遺伝子領域で相同組換えが起きる頻度が上昇したことによると考えている。これらの結果は、トリコスポロン・アサヒのku70遺伝子欠損株を親株として高効率で標的遺伝子を欠損させることができることを示唆している。トリコスポロン属真菌での遺伝子欠損株の樹立は本研究が初めてである。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画の通り、令和２年度にトリコスポロン・アサヒのカイコ感染モデルを確立でき、令和3年度にアグロバクテリウムを用いた遺伝子導入法を駆使してトリコスポロン・アサヒの遺伝子欠損株を作製することに成功した。これらの結果は、トリコスポロン・アサヒの感染症の研究に重要になる簡便な感染モデルの確立という目的とトリコスポロン・アサヒの遺伝子欠損株の樹立という目的が達成されており、研究が順調に進展していることを示している。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和４年度では、これまでに確立したトリコスポロン・アサヒの遺伝子欠損株を作製する方法を用いて、トリコスポロン・ア
サヒの近縁種であるクリプトコッカス ・ネオフォルマンスの病原性に関与することが知られている遺伝子に相同性の高いトリコスポロン・アサヒの遺伝子を欠損させてカイコに対する病原性に関わるか検証する。特に、カルシニューリン経路やGpa経路はトリコスポロン・アサヒにも保存されていることがゲノム解析から明らかになったので、これらのシグナル伝達経路がトリコスポロン・アサヒの病原性に関与するか明らかにする。
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| Causes of Carryover |
令和３年度の前半では前年度の繰越があったので、そこから優先的に費用を支払ったので、残った助成金は次年度に繰越することとした。また、令和４年度では、遺伝子欠損株の作製を行うので、遺伝子組換えのために必要な酵素類などを多数購入する予定である。
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