Application of a gene expression visualization system to analyze cancer stem cell generation

2023 Fiscal Year Final Research Report

• Project/Area Number: 20K08101
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 52040:Radiological sciences-related
• Research Institution: University of Toyama
• Principal Investigator: Ogawa Ryohei 富山大学, 学術研究部医学系, 准教授 (60334736)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鍵谷 豪 北里大学, 医療衛生学部, 教授 (30524243) ; 趙 慶利 富山大学, 学術研究部医学系, 助教 (90313593) ; 渡部 明彦 富山大学, 学術研究部医学系, 講師 (20377253)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: 上皮間葉転換 / 蛍光タンパク / CRISPR-Cas9 / がん幹細胞

Outline of Final Research Achievements

We aimed to construct a vector that introduces DsRed, expressed downstream of the E-cadherin (Ecad) gene in human cancer cell lines via a viral 2A sequence. Despite the difficulties, we successfully generated recombinant cells by creating an improved vector with an extended homologous recombination region. Using a vector that introduces EGFP, expressed downstream of the Oct4 gene via a 2A sequence, we then created double recombinant cells, LNCaP/Ecad-DsR3/Oct4-EGFP. Tests on these cells revealed that the suppression levels of Ecad and DsRed expression did not completely match, and there was no observed suppression of EGFP expression. We plan to continue our investigations in the future.

Free Research Field

放射線生物学

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

本研究の完結により、EMTからCSC形成についての分子経路の解析が可能になる。また、それにより新規がん治療の開発に結びつく可能性がある。さらに、本研究で実施している遺伝子発現の可視化については、さまざまな遺伝子に応用することが可能であり、多くの細胞応答で見られる現象を分子レベルで簡便に解析するためのツールとなる。