2023 Fiscal Year Annual Research Report
脱分化脂肪細胞由来エクソソームが拓く広域下顎骨骨欠損の再建
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20K10195
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| Research Institution | Osaka Dental University |
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Principal Investigator |
窪 寛仁 大阪歯科大学, 歯学部, 講師 (70388362)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
橋本 典也 大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (20228430)
本田 義知 大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (90547259)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | エクソソーム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
顎顔面領域における下顎骨欠損は先天性のほか、外傷、感染、腫瘍の切除によって生じ、これに対して、骨移植や仮骨延長による骨の再建が行われてきた。しかし、侵襲性の点から、今後は細胞を用いた再生医療による安全で確実な骨増生が望まれている。再生医療の三要素である細胞には、純度が高く分化能の高いヒト頬脂肪体由来脱分化脂肪細（DFATs）、シグナル因子は、血管新生作用を有しドラッグリバリーの役割もかねたDFATsエクソソームを用いる。
生後8週齢SD系雄性ラットの鼠径部より脂肪組織を採取し，天井培養法にてDFATを作製した．作製した細胞をフローサイトメトリー解析にて評価した．DFATの培養上清よりサイズ排除クロマトグラフィー法にてEvの抽出を行った．透過電子顕微鏡（TEM）による画像解析，ナノサイト測定，ナノフローサイトメトリー解析を行った．また，骨分化培地にDFAT-Evを添加した際の骨分化マーカーの発言の差をRT-PCR法にて評価した．
作製した細胞のフローサイトメトリーを行いDFATの樹立を確認した．DFAT-Evは，ナノフローサイトメトリーにてCD9，CD81陽性であった．ナノサイト解析の結果は平均粒子径122～140nmであり，検体中の濃度は4.30～4.74（9X10/ml）であった．TEMにて脂質二重膜をもつ直径約100nmの粒子を確認した．RT-PCR法でDFAT-Evを添加した骨芽細胞分化マーカーの発現に差を認めた．
DFAT-Evが骨芽細胞分化を促すことが示唆された．今後in-vivoでの骨再生への影響と機序についてさらなる検討を行う予定である．
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