2020 Fiscal Year Research-status Report
細胞診検体から遺伝子点変異を視覚化し、細胞異型が生じるメカニズムを解明する
| Project/Area Number |
20K16198
|
|---|
| Research Institution | Wakayama Medical University |
|---|
Principal Investigator |
松崎 生笛 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (60647428)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | 細胞診 / 遺伝子変異 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、細胞診検体を用いて、がん細胞の遺伝子点変異を細胞内（in situ）で視覚化する方法を開発し、形態学的変化を解析することを目指している。変異細胞に生じる形態学的変化をとらえることができれば、細胞診の正診率の向上のみならず、遺伝子検査に適正な検体か判断が容易になる可能性が高い。視覚化する方法は、以前から開発を続けているRolling Circle Amplification（RCA）法に特異性が優れた人工核酸を利用し、DNAにおける点変異を検出する。また、新たにmRNAを対象にBaseScope法を細胞診材料に応用し、細胞内で点変異を視覚化することを目指す。
2020年度は、細胞診材料から、DNAを抽出し、NGS法により変異を検出した。細胞診で通常使用される固定液の違い、細胞量や固定前の状態において、変異検出への影響を検討した。これにより、細胞内（in situ）で視覚化する際にどの条件がいいかのおおよその検討を行った。
さらに、in situで検出する方法の一つの候補としてBasescope法を用いる予定だが、Basescope法より広く知られているRNAscopeを用いて手技を確認した。
今後は条件設定を決定し、臨床検体を用いて、点変異が検出できるかを検討する予定である。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
in situで検出する変異の候補を調べるために、細胞診材料からNGSを用いて得られた変異した。
一方、in situでの検出は、Rolling Circle Amplification法の原理に人工核酸を用いた方法を開発し、用いる予定で合ったが、in vitroで用いた条件設定では検出が困難であった。またBasescopeより広く知られているRNAscopeを用いて手技を確認した。その後、Basescopeを用いて新たに条件設定を行っていたため、当初の予定よりやや遅れてい
る。しかし、培養細胞を用いたおおよその条件設定はすでに終了し、今後は臨床材料における条件設定を検討する予定である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
細胞診材料を用いて、in situで点変異を検出する方法の確立を目指す。
るRolling Circle Amplification法に特異性が優れた人工核酸を利用する方法については、条件を検討し、in situでの検出を目指す。
BaseScopeを用いる方法については、細胞診材料における条件設定を決定し、尿細胞診におけるFGFR3などの点変異の検出の検討を行う。
|
