2022 Fiscal Year Annual Research Report
細胞診検体から遺伝子点変異を視覚化し、細胞異型が生じるメカニズムを解明する
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20K16198
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
松崎 生笛 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (60647428)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 細胞診 / 遺伝子変異 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、細胞診検体を用いて、がん細胞の遺伝子点変異を細胞内（in situ）で視覚化する方法を開発し、形態学的変化を解析することを目指している。変異細胞に生じる形態学的変化をとらえることができれば、細胞診の正診率の向上のみならず、遺伝子検査に適正な検体か否かの判断が容易になる可能性が高く、臨床的にも意義不快研究となることが予想される。
視覚化する方法は、以前から開発を続けているRolling Circle Amplification（RCA）法に特異性が優れた人工核酸を利用し、DNAにおける点変異を検出する。また、新たにmRNAを対象にBaseScope法を細胞診材料に応用し、細胞内で点変異を視覚化することを目指す。
2022年度は、細胞診材料から、DNAを抽出し、NGS法を用いて検出された変異について、頻度などを吟味した。これにより、細胞内（in situ）で視覚化する際に、細胞量などのおおよその基準を設けることができた。
in situで検出する方法の一つの候補として、mRNAに対してはBasescope法を用いる予定であったが、新たに、RCA法を原理とするmutaFISH Probeに着目した。KRASのprobeを使用し、培養細胞を用いて、条件検討を行ったところ、細胞診材料でも応用が可能であると判断した。
今後は、臨床検体を用いて、点変異が検出できるかを検討する予定である。
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