急性骨髄性白血病に対するCLL-1特異的キメラ抗原受容体T細胞療法の改良

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K16395
• Research Institution: Teikyo University
• Principal Investigator: 田代 晴子 帝京大学, 医学部, 准教授 (50433884)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: CAR-T / AML / CLL-1

Outline of Annual Research Achievements

前年度までに、レトロウイルスによるConstitutive signaling from an engineered IL-7 receptor (C7R)とCLL-1 CAR-TのDouble　transductionによって、30%程度の共発現の細胞が得られるようになった。CLL-1 CAR-TとC7R/CLL-1 CAR-Tに、memory phenotypeに違いがないことを確認した。これらの細胞を用いて、serial co-culture (3日に1回同数の腫瘍細胞をT細胞に加える）を行ったところ、CLL-1 CAR-Tでは２回の腫瘍の再投入までしか腫瘍細胞をコントロールすることができなかったが、C7R/CLL-1 CAR-Tでは4-5回の新しい腫瘍の投入後も腫瘍細胞を殺し続けることができた。C7R/CLL-1 CAR-TのConditionではco-culture後もT細胞が増殖しており、これは、抗腫瘍効果の持続は、T細胞のPersistencyが良いためであると考えられた。次にToxicityを見るために臍帯血を用いてColony forming assayを行なった。先行の研究で、CLL-1 CAR-T単独では、造血幹細胞からのcolony形成を抑制しないことを確認していたが、C7R/CLL-1 CAR-Tでは有意にcolony形成を抑制してしまった。原因については、C7R/CLL-1 CAR-Tは培養の最後（14日後）にも、Methocult mediumの中にT細胞が存在しており、直接的な幹細胞への障害のほか、Growth factorの競合などが考えられ、検討中である。
CLL-1 CARとC7Rを１つのコンストラクトにした「CLL-1.BBz-2A-dCD34.C7R」を作成した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

in vitroの実験は概ね計画通りに進んでいるが、in vivoのための新しいコンストラクトの作成にやや時間を要し、開始が遅れた。

Strategy for Future Research Activity

in vivoは現在進行中であり、投与細胞数のtitrationを行なっている。至適投与量決定後、本試験に入る予定である。

Causes of Carryover

in vivoの実験にやや遅れが生じたため、マウス購入費などが少なかった。