Construction and application of hepatitis B virus reporter system using fluorescence-activating protein

2023 Fiscal Year Final Research Report

• Project/Area Number: 20K17042
• Research Category: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Review Section: Basic Section 53010:Gastroenterology-related
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: Himeno Misao 東京大学, 大学院医学系研究科(医学部), 助教 (80706416)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: B型肝炎ウイルス / レポーターアッセイ / 肝硬変 / 肝星細胞 / 薬剤スクリーニング

Outline of Final Research Achievements

The aim of this project was construction and its application of recombinant hepatitis B virus (HBV) bearing a fluorescence-activating protein (Y-FAST) sequence. The recombinant HBV was successfully constructed and
expressed well in HepG2 cells by plasmid transfection. The cell culture supernatant was collected and its Dane particles, which mean matured virus particles, were separated into the same fraction as the wild-type virus by using density gradient centrifugation. That indicates the recombinant virus formed mature particles. However, it was found that enhanced replication levels are required to detect infected cells efficiently. These results were investigated its applications to liver cirrhosis model and drug screening.

Free Research Field

ウイルス学

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

現行のHBV複製系ではウイルスを検出するために、細胞の固定や溶解が必要である。本研究で用いた蛍光活性化タンパク質は細胞に毒性のない細胞透過性蛍光活性化試薬の添加によって検出可能であるため、HBV複製を経時的に観察可能な新規の手法を提供する。HBV感染症は現在ワクチンが存在するものの、ウイルスを完全に排除する治療法がなく、また治療後の再活性化と肝硬変・肝細胞がんが問題となっている。本研究が応用されれば、大規模な新規治療薬のスクリーニングや、治療後再活性化と肝硬変を再現するモデルとなり得るため、治療薬開発という社会的意義と、病態解明という学術的意義がある。