2020 Fiscal Year Research-status Report
アセトアルデヒド曝露により誘発される突然変異パターンの同定
Project/Area Number |
20K17047
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
玉置 将司 京都大学, 医学研究科, 医員 (00796948)
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Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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Keywords | 食道 / アセトアルデヒド |
Outline of Annual Research Achievements |
アルコール摂取は食道扁平上皮がんの主要な危険因子である。アルコール代謝産物であるアセトアルデヒドは、DNA損傷や遺伝子変異、染色体異常を誘発し、食道発がんにおいて中心的な役割を果たす。近年、臨床検体を用いた解析においてアルコール多飲者における特徴的な突然変異パターンが明らかにされつつあるが、アセトアルデヒドにより誘発される遺伝子変異との関連は十分に検証されていない。本研究では、食道上皮にアセトアルデヒドを長期間曝露することにより誘発される突然変異パターンを明らかにすることを目的とする。 正常のヒト食道上皮から樹立した食道上皮細胞(EPC2-hTERT)、およびALDH2*1/*2遺伝子多型保有者の食道上皮から樹立した食道上皮細胞(KEPC-HE1)をアセトアルデヒド0mM、アセトアルデヒド0.2mMの濃度で2ヶ月間曝露した。アセトアルデヒド曝露細胞、アセトアルデヒド非曝露細胞を回収し、限界希釈法を用いてシングルセルクローニングしたのちDNAを抽出した。今後は、別のALDH2*1/*2遺伝子多型保有者の食道上皮から樹立した食道上皮細胞(KEPC-HE2)も用いてアセトアルデヒドを2か月間曝露し、シングルセルクローニングしたのちDNAを抽出する。これらのEPC2-hTERT、KEPC-HE1、KEPC-HE2から得られたDNAサンプルを用いて、次世代シークエンサーによる全ゲノム解析を行い、アセトアルデヒド曝露細胞、アセトアルデヒド非曝露細胞の突然変異パターンについて検証する予定である。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
EPC2-hTERTおよびKEPC-HE1からのDNA抽出は既に終了しているが、KEPC-HE2を用いたアセトアルデヒド曝露細胞、非曝露細胞からのDNA抽出は終了しておらず、やや遅延している。
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Strategy for Future Research Activity |
今後は、EPC2-hTERT、KEPC-HE1を用いたアセトアルデヒド曝露細胞、アセトアルデヒド非曝露細胞からから抽出されたDNAに加え、KEPC-HE2も用いてアセトアルデヒド長期曝露を行いDNAを抽出する。これらのDNAサンプルについて次世代シークエンサーによる全ゲノム解析を行い、アセトアルデヒド曝露細胞、アセトアルデヒド非曝露細胞の突然変異パターンを検証する予定である。また、In vivoの実験としては、Aldh2ノックアウトマウス、野生型マウスに経口的に水もしくは10%エタノールの経口投与を行い、エタノール投与群、エタノール非投与群の食道組織から実体顕微鏡を用いて食道上皮を採取しDNAを抽出後、エタノール投与群、エタノール非投与群について次世代シークエンサーを用いて全ゲノム解析を行い、アセトアルデヒド曝露により誘導される突然変異パターンを検証する予定である。
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