2021 Fiscal Year Research-status Report
インフルエンザ菌性慢性中耳炎マウスにおける免疫応答とTLR4の関与
Project/Area Number |
20K18257
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Research Institution | Oita University |
Principal Investigator |
松永 崇志 大分大学, 医学部, 客員研究員 (10869861)
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Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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Keywords | 慢性中耳炎 / インフルエンザ菌 / TLR4 |
Outline of Annual Research Achievements |
C3H/HeJマウス(TLR4変異)およびC3H/HeNマウス(WT)に対して、顕微鏡下に無莢膜型インフルエンザ菌(NTHi)を中耳骨胞内に注入し、同時に耳管閉塞処置を 行い慢性中耳炎マウスモデルを作成した。1週間ごとに鼓膜所見を観察し、それぞれ1週間後、2週間後、1ヶ月後に断頭して中耳洗浄液を採取してチョコレート 寒天培地に塗布してNTHiのコロニー数を計測した。また断頭して得られたマウス頭部は中耳骨胞を含めてホルマリン固定し、脱灰した上でパラフィン切片を作成 した。鼓膜所見は1週間マウスはC3H/HeJでは6匹中4匹、2週間マウスは4匹中3匹、1ヶ月マウスは4匹中3匹に中耳貯留液を確認した一方で、C3H/HeNでは1週間マウ スは6匹中6匹、2週間マウスは4匹中2匹、1ヶ月マウスは5匹中0匹と長期になるにつれてTLR4変異したマウスでは中耳炎が遷延化しやすい傾向にあった。また、そ れぞれの生菌数は中耳貯留液の100倍希釈での培養においてそれぞれのコロニー数を計測すると、1週間マウスのC3H/HeJは平均445個、C3H/HeNは平均318個、2週間マウスのC3H/HeJは平均411個、C3H/HeNは平均162個、1ヶ月マウスのC3H/HeJは平均196個であり、C3H/HeNは生育しなかった。これらの結果から、TLR4変異に よって急性期の中耳炎のみならず、慢性期の中耳炎に関しても影響を及ぼしていることが示唆された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
耳管閉塞処置を行なった慢性中耳炎マウスにおいて、母数をさらに増やしてC3H/HeJマウス(TLR4変異)およびC3H/HeNマウス(WT)を用いて鼓膜所見の観察と細菌クリアランスの計測を行う予定であったが、COVID-19の世界的な流行による試薬購入の遅延や実験施設の改修工事に伴い実験そのものができなくなってしまったため、本研究計画の進行が大幅に遅れてしまった。
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Strategy for Future Research Activity |
実験施設の改修工事が本年度中に終了するため、実験施設が利用可能となり次第本研究を再開する予定である。
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Causes of Carryover |
昨年度は実験の進行に大幅な遅れが生じたため、購入を検討していた物品が購入できず、次年度に繰り越してしまった。今後は本研究で使用する物品に加え、そのほかの物品に使用を検討する。
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