2009 Fiscal Year Annual Research Report
自己由来幹細胞とヒト人工染色体ベクターを用いた筋ジストロフィー遺伝子治療
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21249022
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
押村 光雄 Tottori University, 大学院・医学系研究科, 教授 (20111619)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
香月 康宏 鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (90403401)
尾崎 充彦 鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (40325006)
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| Keywords | ヒト人工染色体 / 遺伝子治療 / 筋ジストロフィー / 染色体工学 / 間葉系幹細胞 / mesoangioblast細胞 |
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| Research Abstract |
デュシャンヌ型筋ジストロフィー(DMD)はヒトX番染色体上に存在するDMD遺伝子の機能欠損により引き起こされる進行性筋萎縮症である。DMD遺伝子は全長2.4Mbにも及ぶ巨大な遺伝子で複雑な転写調節を受けていると考えられることから2.4Mbの巨大遺伝子を導入するベクターが存在しない。本年度はこれまでに作製したDMD-HACベクターおよびmesoangioblast細胞を用いた治療戦略を行った。筋ジストロフィーのモデルマウスであるmdxマウスから、mesoangioblast細胞を樹立し、昨年度までに構築・精製したDMD-HACを微小核細胞融合法にて導入した。GFP陽性コロニーを29クローンピックアップし、そのうち24クローンでシングルセル由来の増殖を確認した。それらの24クローンについて、PCR法にて、DMDならびにHAC上のプライマーを用いてゲノムの存在を確認した結果、13クローンでDMD-HAC全長が存在することが明らかとなった。次に、それらのうちの8クローンについて、FISH解析を行った結果、6クローンについて、DMD-HACが宿主染色体とは独立に保持されていることが確認された。来年度は上記細胞を用いて、in vivoでの性能評価を実施し、自己幹細胞による遺伝子治療モデル構築を目指す。また、より効率よく筋肉に分化誘導できる系の確立も平行して実施する。
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